权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

OMVに着目した脳バリア破綻とアルツハイマー病におけるジンジパイン仮説の検証

以 OMV 为重点验证牙龈蛋白酶假说在脑屏障破坏和阿尔茨海默氏病中的作用

基本信息

批准号：
22K15287
负责人：
野中さおり
金额：
$ 3万
依托单位：
Yasuda Women's University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者は、これまでに、アルツハイマー病の発症・増悪を招くとされる代表的な歯周病菌のジンジバリス菌が分泌するプロテアーゼのジンジパインが、密着結合構成タンパク質のZO-1やオクルディンを直接分解することで、脳血管内皮細胞の透過性を上げ、菌自体や病原性因子の脳実質への侵入を可能にすることを発見した。しかし、これらジンジパインの標的タンパク質のアミノ酸配列を調べたところ、ジンジパインによる切断可能配列が、細胞外に出ていないことが分かった。このことは、ジンジパインが細胞内に入ってこれらタンパク質を切断することを示唆するが、その仕組みはわかっていなかった。2022年度はその解明に取り組み、以下のような実験により、ジンジバリス菌が分泌するouter membrane vesicle(OMV）を運び屋としてジンジパインが細胞内に侵入し、ZO-1やオクルディンといった密着結合構成タンパク質を細胞の内側から分解することを明らかにした。1. ジンジパインの結合したOMVのヒト脳血管内皮細胞株への侵入：ジンジバリス菌の培養上清からエキソソーム抽出キットを用いて調製したOMVを蛍光色素のCy5でラベルした後、ヒト脳血管内皮細胞株(hCMEC/D3細胞)に添加し、共焦点レーザー顕微鏡で観察した。その結果、Cy5のシグナルが細胞内から検出された。また、同じ細胞に対して、抗ジンジパイン抗体を用いた免疫染色を行ったところ、そのシグナルが細胞内のCy5シグナルと重なっていた。以上のことから、ジンジパインはOMVに結合した状態で脳血管内皮細胞に侵入すると考えられた。2. ジンジバリス菌OMVによる密着結合タンパク質の分解：OMVのみを添加しても、hCMEC/D3細胞におけるZO-1及びオクルディンレベルの減少が見られることがウエスタンブロッティングで確認された。

The pathogens of the disease, the bacteria that represent the disease, the bacteria that secrete the bacteria, the bacteria The pathogenic factor of the bacteria may invade the pathogeny. Please tell me that the configuration of the acid is not available, that is, the possible configuration is cut off, and the extracellular configuration is not available. Please tell me that you are not allowed to enter the cell in the cell. You can cut it off and show that you are instigated. In the year 2022, the following data sets were collected, and the following data were collected. The secretion of outer membrane vesicle (OMV) was detected by bacteria. The cell invasion was detected by ZO-1. The results showed that the intracellular DNA was broken down in the cells. 1. The invasion of the vascular endothelial cell line (hCMEC/D3 cell line) was detected by the addition of the vascular endothelial cell line (hCMEC/D3 cell line) and the addition of the vascular endothelial cell line (hCMEC/D3 cell line). After the vascular endothelial cell line was invaded, the supernatant was cultured, the supernatant was cultured, the supernatant was extracted, the OMV was used, the light pigment was Cy5, and the vascular endothelial cell line (vascular endothelial cell) was added and confocal. The results showed that the Cy5 response was significantly higher than that of the control group. The immune staining method was used to detect the concentration of Cy5 in the cells of the same cell, the antibody of the same cell and the antibody of the same cell. The combination of OMV and vascular endothelial cell invasion is important in the diagnosis of vascular invasion. two。 The bacteria OMV were closely linked with each other and were decomposed. OMVs were added, hCMEC/D3 cells were added, and hCMEC/D3 cells were added to each other. Please make sure that you did not.