B・gingivalis27K特異抗原遺伝子の分子生物学的研究

牙龈芽孢杆菌27K特异性抗原基因的分子生物学研究

• 批准号: 63570879
• 负责人: 安孫子 宜光
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570879/
• 关键词: 歯周病; B・gingivalis; 細胞外膜; 抗原蛋白質; 遺伝子クローニング; 塩基配列

B・gingivalis381株outer membrane画分に対する抗血清を用いた免疫学的スクリーニングで得られた遺伝子クローンMD111は、40K抗原蛋白質をコードしている。pMD111 plasmid中の挿入2.0kbDNAの全塩基配列の解読を行った。pMD111 2.0kb中には969bpより構成されているopen reading flame が存在し、start coden上流に、典型的なプロモーター領域は認められないが、パリンドーム配列をもつsterm partsより成るターミナル領域は認められた。塩基配列から推定したアミノ酸組成は、E・coliに産生させたりコンビナント40K蛋白質の組成とよく一致し、疎水性アミノ酸に富む(44%)ことが判明した。また、V8プロテアーゼ、リジルエンドペプチターゼ限定分解によるC末端を含むpeptidesのアミノ酸配列と塩基配列データからのアミノ酸配列とは良く一致した。遺伝子構造から推定したN末端アミノ酸配列は疎水性アミノ酸に富む領域(21アミノ酸)が存在し、これに続く20アミノ酸の配列はリコンビナント40K蛋白質のN末端アミノ酸配列と一致し、リーダーペプチド領域を確定した。また、40Kリコンビナント蛋白質に対する抗血清が先に報告したB・gingivalis特異抗原27K(Adv.dent.Res.2:310-314.1988.)と反応したことから、27K蛋白質のアミノ酸配列を検討したところ、N末端から114番目以降のアミノ酸配列とよく一致していた。すでに27K蛋白質は、B・gingivalis特異抗原であることが判明しているので、MD111が産生する40Kリコンビナント蛋白質はB・gingivalisに感染した患者の血清抗体価測定の為の有用な特異抗原となり得ること、さらにpMD111 DNAの全塩基配列が解読できたことから、DNA複製のprimerが作成出来れば、pMD111挿入DNAをprobeに用いて、DNA polymerase chain reaction法により、歯周ポケット内B・gingivalisの局在について診断することが出来よう。

B. gingivalis381 strain outer membrane analysis of antiserum used in immunology was obtained from MD111 and 40K antigen protein. pMD111 plasmid contains 2.0 kb DNA and its nucleotide sequence is determined. pMD111 2.0kb file contains 969bp open reading flame, start code upstream, typical field, sterm parts, start-up code upstream, start-up code upstream. The protein composition of E. coli was consistent with that of E. coli, and the protein content was rich in acid (44%). The C-terminal of the protein contains peptides and the amino acid sequence of the protein is identical to that of the amino acid sequence. The structure of the protein was estimated to be the N-terminal amino acid sequence of the protein, and the N-terminal amino acid sequence of the protein was determined to be the same as that of the protein. Antisera against B. gingivalis specific antigen 27K (Adv.dent.Res.2:310-314.1988.) 27K protein and its amino acid sequence are discussed in detail. 27K protein is identified as a specific antigen for B. gingivalis and MD111 is produced. 40K protein is produced as a specific antigen for B. gingivalis infection and serum antibody is detected in patients infected with pMD111 DNA. DNA replication primer is produced as a probe for pMD111 DNA. DNA polymerase chain reaction method in the diagnosis of B. gingivalis

项目成果

Y.Abiko,・M.Hayakawa,・H.Aoki,・T.Kikuchi,・H.Shimatake,・H.Takiguchi,: Journal of Denatal Research. 67. 238 (1988)

Y. Abiko、M.Hayakawa、H.Aoki、T.Kikuchi、H.Shimatake、H.Takiguchi，《生殖研究杂志》67. 238 (1988)。

Y.Abiko,・M.Hayakawa,・H.Aoki,・H.Takiguci,: Advances in Dental Research. 2(2). 310-314 (1988)

Y. Abiko、M. Hayakawa、H. Aoki、H. Takiguci，：牙科研究进展 2(2) 310-314 (1988)。