Charakterisierung der Faltungs- und Fehlfaltungseigenschaften des Hamster-Prionproteins

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Anhand von vergleichenden in vitro Untersuchungen zur Faltung und Aggregation des Scrapie-assoziierten Prionproteins PrP27-30 sollen mittels FT-IR Differenzspektroskopie und Mikro-StoppedFlow Techniken Ent- und Rückfaltungsversuche in chaotropen Agenzien bzw. Detergens/Lipid/Protein-Mischungen und mittels H/D-Austauschexperimenten die Struktur des Prionproteins charakterisiert werden. Mit Hilfe von Proteinase K Verdau-Experimenten und FT-IR Spektroskopie wird geprüft, inwieweit die Struktur der Rückfaltungs- und Aggregationsprodukte aus chaotropischen Agenzien mit denjenigen der Ausgangsprodukte übereinstimmen, und ob sie Infektiösität besitzen. Es soll sowohl das PrP27-30 des Stammes 263K, welches aus verschiedenen Arealen des Hamsterhirns isoliert wird, als auch das PrPres anderer Hamster-adaptierter Prionstämme, hinsichtlich struktureller Unterschiede untersucht werden. Weiter werden mittels zeitaufgelöster FT-IR Spektroskopie systematische Faltungsstudien zur Konversion des Hamster PrPc(90-231) in die b-Faltblatt-reiche Variante b-RpP durchgeführt. Hierfür müssen die Faltungseigenschaften sowohl des intakten PrPc(90-231) als auch seiner reduzierten Form in Abhängigkeit des pH-Werts und der Konzentration chaotropischer Agenzien charakterisiert werden. In weitergehenden Untersuchungen werden, ausgehend vom b-PrP, Langzeitexperimente zur in vitro Fibrillogenese aus nativem PrPc durchgeführt.