牛の早期妊娠因子(EPF)特異抗体の作出と妊娠診断への応用に関する研究

牛早孕因子（EPF）特异性抗体的制备及其在妊娠诊断中的应用研究

• 批准号: 01560282
• 负责人: 安田 泰久
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Iwate University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01560282/
• 关键词: 牛血清; EPF; RIT値; 妊娠診断

牛の早期妊娠因子(EPF)は、妊娠6-7日目以降母牛の血液中に出現することから、早期の妊娠診断への応用ならびに移植した胚の生存の確認、妊娠継続のモニタ-としての利用が期待される。しかし、EPFは間接のロゼット抑制反応によっ測定され、手法も煩雑で特異的でないことから測定法の改良が望まれて居り、EPFの分離・抽出も試みられている。本研究は、WILSONら(1983)および安田ら(1989)の方法により、妊娠牛血清からRIT値の高い分画を抽出し、ウサギに免疫して抗体を作製、この抗体を用いて早期妊娠診断を行うことを目的とした。妊娠血清は、妊娠5-6週の11頭のホルスタイン種より採取した。これらは、RIT値と直腸検査によって妊娠が確認された牛である。EPFの分離・抽出は、妊娠血清5lを限外濾過により1/50に濃縮後、イオン交換DEAE Sepharose Fast Flowを通した。そこで、吸着と非吸着分画のRIT値を求め、MORIYAMA他(1989)によりRIT値4以上をEPFの含まれる分画と判定した。この非吸着分画はCM-Sepharose Fost Flowに適用、0.05M Nacolを含む緩衝液でカラムに吸着する分画を集めた。さらに、この分画を再びDEAEカラムに適用、その非吸着分画(CM-2)をFPLC Superose 12に適用した。一方、CM-2分画はウサギに免疫して抗体を作製した。次の点が指摘された。1)RIT値は、CM-2分画で4、FPLC-2分画で5となった。2)A280nmでFPLC-2分画を測定すると、1つの明瞭なピ-クと6つのピ-クが観察された。3)CM-2分画のSDS-PAGEは、5つのバンド(60、50、40、30、と20Kd)が観察された。4)CM-2分画のImmunoblottingは、6本(66、45、30、と20Kd)が指摘された。現在、雄血清と非妊娠血清による吸収試験を実施、妊娠特異分画(EPF分画)の特異性の検討を、Immunoblotting、免疫電気泳動法および寒天内拡散法によって実施している。

Bovine early pregnancy factor (EPF) is expected to be present in the blood of cows after 6-7 days of gestation, used for early pregnancy diagnosis, confirmation of embryo survival, and utilization of pregnancy status. EPF is an indirect inhibitor of anti-inflammatory activity. It is a specific method for the determination of anti-inflammatory activity. The aim of this study is to extract and prepare antibodies against pregnant bovine serum from the serum of WILSON (1983) and Yasuda (1989). Pregnant serum, 5-6 weeks of pregnancy and 11 head of the disease. The pregnancy was confirmed by RIT. EPF isolation, extraction, pregnancy serum 5l limit filtration, 1/50 concentration, exchange DEAE Sepharose Fast Flow MORIYAMA (1989): RIT value 4 or more: EPF: This non-sorption assay is suitable for CM-Sepharose Fost Flow, 0.05M Nacol, or a buffer solution containing Nacol. For this purpose, the DEAE system is applicable, the CM-2 system is applicable, and the FPLC Superose 12 is applicable. One side, CM-2 points, the other side, CM-2 points, CM-2 points. The second point is to blame. 1)RIT, CM-2 4, FPLC-2 5. 2)A280nm FPLC-2 spectrum measurement, 1 clear-6 clear. 3) SDS-PAGE analysis of CM-2 was carried out in 5 samples (60, 50, 40, 30, 20Kd). 4)CM-2 is divided into 6 parts (66, 45, 30, and 20Kd). Now, male serum and non-pregnant serum absorption test implementation, pregnancy specific analysis (EPF analysis) of the specificity of the study, Immunoblotting, immunoelectrokinetic method and cold day dispersion method implementation.