牛の早期妊娠因子(EPF)の抽出と,免疫学的測定法の開発に関する研究

牛早孕因子（EPF）提取研究及免疫检测方法开发

• 批准号: 02660266
• 负责人: 安田 泰久
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Iwate University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1991
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02660266/
• 关键词: 牛血清; EPF; 免疫学的測定法; 妊娠診断; モノクロナル抗体

牛の早期妊娠因子(EPF)は、妊娠2日目以降母牛の血液中に出現することから、早期妊娠診断への応用、移植した胚の生存の確認ならびに妊娠継続のモニタ-になると期待されている。そこで本研究は、牛EPFに抽出・精製を行い、得られたEPFの生化学的特性を検討するとともに、牛EPFの免疫学的測定法(ELISA)を開発する目的で実施した。材料は、人工授精8日目のホルスタイン種1頭から全採血し、血清10lを得た。この血清のRIT値は6を示し、卵管に受精卵が存在したことから妊娠と判定した。EPFの抽出・精製は、限外濾過で10〜100kdの分画を分離,CMーSepharose Fast Flowで50mM Naclを含む緩衝液によって溶出した分画をDEAEーSepharose Fast Flowに適用した。さらに、非吸着分画をFPLCゲル濾過カラムに適用し、EPF陽性分画を採取した。EPFの生化学的検討は、各精製工程で得られた分画をSDSーPAGEによって精製度を検討し、分子量をPAGEで求め、O'Farrellの方法による等電点を求めた。さらに、抗一非妊娠血清IgGを用いてイムノブロッテングを行った。現在、抗一EPFモノクロナル抗体を作製、ミエロ-マとの融合を実施している。その結果、EPFの分子量は21.5KDと推定された。しかし、非妊娠血清IgGと妊娠血清由来のDEAEー非吸着分画とのイムノブロッテングで22KDと21.5KDのバンドは観察されてなかった。これは、PVDF膜への転写が不充分なためと考えられ、現在再検討している。等電点は二次元電気泳動から、pH6.3と推定された。また、EPFの構造について、2ーメルカプトエタノ-ルで環元されてないことから、単量体と推測された。妊娠由来のDEAEー非吸着分画とSDSーPAGEから切り出した22KDならびに21.5KDのバンドをラットに免疫し、モノクロナル抗体のスクリ-ニング用ELISAの測定系確立を進めている。

Bovine early pregnancy factor (EPF), pregnancy 2 days after pregnancy, early pregnancy, pregnancy and pregnancy. In this study, bovine EPF extract, biochemical characteristics of bovine EPF, bovine EPF immunological assay (ELISA) and biochemical characteristics of bovine DNA were obtained. The material and artificial insemination were used for 8 days. The whole blood and serum were obtained. The serum RIT 6 indicates that there is a pregnancy diagnosis in the fertilized egg of the egg tube. The extract of EPF is separated by 10~100kd, and the 50mM Nacl of CM is separated by Sepharose Fast Flow. The solution is extracted, the solution is dissolved, and the drawing is separated by DEAE. You need to use FPLC and EPF to separate the images. EPF biochemistry, precision engineering, SDS, PAGE, precision, molecular weight, PAGE, O'Farrell, etc. The serum of anti-pregnancy and anti-pregnancy (IgG) was used to treat the disease. Now, the fusion of anti-EPF antibody and anti-EPF antibody is effective. The results showed that the molecular weight of EPF and the molecular weight of 21.5KD were presumed to be sensitive. IgG, non-pregnant serum: the origin of pregnancy serum, DEAE, non-aspiration, pregnancy, 21.5KD, 21.5KD, pregnancy, pregnancy. Please do not write enough PVDF film, and now you will need to pay attention to it. At the same time, the two-dimensional electrophoretic swimming performance and pH6.3 performance are presumed to be affected. Please, EPF, please, please. The cause of pregnancy is DEAE. Non-aspiration, SDS, PAGE, 22KD, 22KD, 21.5KD, 21.5KD, immune, antibody, antibody,