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遺伝子増幅法を用いたウィルス性心筋炎の診断

基因扩增法诊断病毒性心肌炎

基本信息

批准号：
01570468
负责人：
土持英嗣
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570468/
关键词：
拡張型心筋症コクサッキ-ウィルス持続感染遺伝子増幅法

项目摘要

本研究の最終目的は、拡張型心筋症(DCM)の一つの発症機序とされる心筋内でのウィルス持続感染の有無をgene amplification(PCR:polymerase chain reaction)の手法を用いることより、正確に診断するところにある。これまでに、西独のKandolfらによりDCM患者の心筋内にコクサッキ-ウィルスの潜在感染が、高率に存在することが報告されているものの、その手法は非特異的反応の多いdot blotting法であり、コクサッキ-ウィルスの存在を示す確実な根拠はない。そこで我々は、PCRを用いて心筋におけるコクサッキ-ウィルスの持続感染の可能性、及び、DCM患者心筋での本ウィルスの存在につき検討した。まず、本ウィルスの異なった2ヶ所の部位で、sense、 antisenseの2個づつのprimerを作製した。一方、心筋よりRNAを抽出し、逆転写酵素により一担cDNAに変換した後、これらのprimerを用いてPCRを行い、目的とする遺伝子が存在するか否かを電気泳動により確認した。その結果、C_3Hマウスにおいては、ウィルス接種後1〜2週目までは心筋内での本ウィルス遺伝子の存在を確認しえたものの、2週目以降は確認不可能であった。ヒトDCM心筋においてもRNAを採取し得た11例の症例のうち、本ウィルス遺伝子の存在を示す根拠には得られなかった。また、本ウィルスがantisenseの状態で存在している可能性もふまえ、同様の実験を行ったが、いずれもその根拠は得られなかった。以上より、心筋内でのコクサッキ-ウィルスの持続感染は、実験例、及び臨床例において否定的である可能性が高いと結論された。従って、Kandolfらの報告は、dot blottingという手法ゆえの非特異的反応をみている可能性があると考えられる。今後、コクサッキ-ウィルス以外のウィルス存在に関し、発現ベクタ-を用いてcDNA libraryの作製等を行っていく必要がある。

The ultimate goal of this study is to explore the mechanism of DCM and the method of gene amplification(PCR:polymerase chain reaction). Therefore, Kandolf of Xidu has reported that there is a high rate of potential infection of the cockroach in the heart muscle of DCM patients. This report is based on multiple dot blotting methods that are not specific to the patient, and the existence of the cockroach is confirmed. The possibility of persistent infection and the existence of the disease in patients with DCM are discussed. The two primer of sense and antisense are controlled. The DNA sequence of a cDNA sequence was determined by PCR, DNA sequencing and DNA sequencing. 1 ~ 2 weeks after inoculation, the existence of C_3H in the muscle was confirmed. 2 weeks later, it was impossible to confirm the existence of C_3H. 11 cases of DCM were detected by RNA analysis. The state of antisense exists, and the possibility of antisense exists. The above mentioned cases of persistent infection, clinical cases and negative cases are highly probable.従って、Kandolfらの报告は、dot blottingという手法ゆえの非特异的反応をみている可能性があると考えられる。In the future, it is necessary to carry out the development of cDNA library in order to improve the quality of cDNA library.