遺伝子増幅法を用いたウィルス性心筋炎の診断

基因扩增法诊断病毒性心肌炎

• 批准号: 01570468
• 负责人: 土持 英嗣
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570468/
• 关键词: 拡張型心筋症; コクサッキ-ウィルス; 持続感染; 遺伝子増幅法

本研究の最終目的は、拡張型心筋症(DCM)の一つの発症機序とされる心筋内でのウィルス持続感染の有無をgene amplification(PCR:polymerase chain reaction)の手法を用いることより、正確に診断するところにある。これまでに、西独のKandolfらによりDCM患者の心筋内にコクサッキ-ウィルスの潜在感染が、高率に存在することが報告されているものの、その手法は非特異的反応の多いdot blotting法であり、コクサッキ-ウィルスの存在を示す確実な根拠はない。そこで我々は、PCRを用いて心筋におけるコクサッキ-ウィルスの持続感染の可能性、及び、DCM患者心筋での本ウィルスの存在につき検討した。まず、本ウィルスの異なった2ヶ所の部位で、sense、 antisenseの2個づつのprimerを作製した。一方、心筋よりRNAを抽出し、逆転写酵素により一担cDNAに変換した後、これらのprimerを用いてPCRを行い、目的とする遺伝子が存在するか否かを電気泳動により確認した。その結果、C_3Hマウスにおいては、ウィルス接種後1〜2週目までは心筋内での本ウィルス遺伝子の存在を確認しえたものの、2週目以降は確認不可能であった。ヒトDCM心筋においてもRNAを採取し得た11例の症例のうち、本ウィルス遺伝子の存在を示す根拠には得られなかった。また、本ウィルスがantisenseの状態で存在している可能性もふまえ、同様の実験を行ったが、いずれもその根拠は得られなかった。以上より、心筋内でのコクサッキ-ウィルスの持続感染は、実験例、及び臨床例において否定的である可能性が高いと結論された。従って、Kandolfらの報告は、dot blottingという手法ゆえの非特異的反応をみている可能性があると考えられる。今後、コクサッキ-ウィルス以外のウィルス存在に関し、発現ベクタ-を用いてcDNA libraryの作製等を行っていく必要がある。

The ultimate purpose of this study is to determine the mechanism of dilatation cardiomyopathy (DCM) and the presence or absence of infection within the myocardium and gene amplification (PCR:polymerase chain The method of reaction) is the use of the method and the correct diagnosis is the method of diagnosis. Kandolf Kandolf of Saidu In the case of infection, the presence of a high rate, the report of the presence of infection, the technique of the infection, the non-specific reaction, the multi-dot The blotting method is as follows:そこで我々は、PCRを用いて心丝におけるコクサッキ-ウィルスのhold続Sense The possibility of infection and the existence of heart muscle in patients with DCM are of great concern.まず、本ウィルスのdifferent なった2ヶshoのpartで、sense、antisenseの2づつのprimerを做出した. One side, Shinji よりRNA を extraction し, reverse writing enzyme により 1 load cDNA に変 した后, これらのpri merを Used PCR を line い, purpose と す る 伝子 が existence す る か か を electrophoresis に よ り confirmation し た.そのRESULTS, C_3H マウスにおいては, ウィルス 1 to 2 weeks after vaccination The existence of の本ウィルス伝子のをconfirmationしえたものの, and it has been confirmed that it is impossible since 2 weeks ago.ヒトDCM 心丝においてもRNAをadopts しget 11 cases of の symptom case のうち, 本ウィルス伝子のexistent をshows すrootには得られなかった.また、本ウィルスがantisense のstate でexisting しているpossibilityもふまえ, 同様の実験を行ったが, いずれもその根拠は得られなかった. The above-mentioned cases of intracardiac infection, intracardiac infection, and clinical cases negate the high possibility of infection and conclude that it is possible.従って, Kandolfらのreportは, dot blottingというtechniqueゆえのnon-specific reaction possibilityがあるとtestえられる. From now on, there will be no need for other products other than コクサッキ-ウィルスのウィルス, and 発行ベクタ-をproduced using the いてcDNA library.

项目成果

黒尾誠: "Developmentally regulated expression of vascular smooth muscle myosin heavy chain isoforms." J.Biol.Chem.(1989)

Makoto Kuroo：“血管平滑肌肌球蛋白重链亚型的发育调节表达。”J.Biol.Chem.(1989)

倉林昌彦: "Molecular cloning and characterization of human atrial and ventricular myosin alkali light chain cDNA clones." J.Biol.Chem.263. 13930-13936 (1988)

Masahiko Kurabayashi：“人心房和心室肌球蛋白碱轻链 cDNA 克隆的分子克隆和表征。J.Biol.Chem.263 (1988)。