心筋カリウムチャンネルの遺伝子クロ-ニングと機能解析

心脏钾通道基因克隆及功能分析

• 批准号: 02670381
• 负责人: 土持 英嗣
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670381/
• 关键词: カリウムチャンネル; 遺伝子クロ-ニング; Xenopus oocyte

心筋には,異った機構によりその開閉が制御される数種のKチャンネルCoutward type,inward type,ATP依存性Kチャンネル等)が存在し,各々が,病態生理において重要な役割を担うことが示唆されている。これらのうち,outward typeに関しては,本遺伝子が,shaker遺伝子と,ホモロジ-が高いことより,この一年間のうちに,いくつかのグル-プより,脳,心筋でのクロ-ニングの成功が学会発表されている。我々も,家免脳より,Kチャンネル遺伝子の単離を行い,その塩基配列を決定した。得られたクロ-ンは,全長2.3kbで,1431b.p.のopen reading frameをもち,477残基のアミノ酸をコ-ドしていた。計算上の分子量は53879であった。本遺伝子は,ラット脳で報告されているRBKIと80%以上の相同性をもち,特に膜貫通部は,H_2でI→F,H_4でF→Iの相違が認められるのみで,その他のアミノ酸は全て一致していた。本クロ-ンをT_7プロモ-タ-をもつベクタ-に組み込むことより,cRNAを作製し,これをXenopus oocyteに注入,その発現蛋白を電気生理学的に解析した。その結果,膜電位依存性にSNAのAtupe outward電流が観察された。この電流はTetra ethyl ammonium(EC50=10mM),4ーAmino pyridiue(EC50=0.1mM),及び,Banium chloride(EC50=10mM)により抑制された。また,外液のK濃度を変化させた際のreversal potontialが100mMであることより,本電流はK電流であることが観察された。本クロ-ンはoocyte注入后,24時間以内に,その蛋白が発現されることより,今后oocyte発現系における有力なpositive controlとして用いることが可能である。そこで,本クロ-ンの発現を指標として,現在,その構造解明にしのぎがけずられているin ward type,及びATP依存性Kチャンネルの発現クロ-ニングを遂行中であり,来年度中には,その構造が我々の手により解明されることが期待される。

Heart Suji には,different ったMechanism によりそのOpen and close がcontrol されるSeveral kinds of のKチャンネルCoutward type,inward type, ATP dependence (Kチャンネル, etc.) exists, each 々が, pathological physiology においてimportant なservice cut を聆ことがshows instigation されている.これらのうち,outward type に关しては, honyi伝子が, shaker 伝子と, ホモロジ-が高いことより, この一年Between the のうちに, the いくつかのグル-プより, 脳, the heart muscle でのクロ-ニングの成が学発表されている. I am 々も, the family is free of 脳 より, Kチャンネル伝子の単里を行い, その塩婩组组をdeterminationした. Get られたクロ-ンは, full length 2.3kbで, 1431b.p.のopen reading frame をもち, 477 residues のアミノ acid をコ-ドしていた. The calculated molecular weight is 53879. The original はは,ラット脳でreport is a RBKI with more than 80% identity, a special film penetration part, H _2でI→F, H_4でF→Iの不　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　logue 　　　　　　　　　的　　　　　　　　　　　　　　　的 parties G _ by _ _ _ 4 で F → I の 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 parties Generation．本クロ-ンをT_7プロモ-タ-をもつベクタ-に组み込むことより,cRNAをproducedし,これをXenopus oocyte injection, analysis of protein and electrophysiology. As a result, the dependence of membrane potential on SNA's Atupe outward current was observed. Tetra ethyl ammonium (EC50=10mM), 4-Amino pyridiue (EC50=0.1mM), and Banium chloride (EC50=10mM) inhibit current.また, the external liquid のK concentration を変化 さ せ た Ji の reversal potontial が 100mM で あ る こ と よ り, the current はK current で あ る こ と が 観 Observation さ れ た. After the injection of this クロ-ンはoocyte, within 24 hours, the そのprotein が発appears されることより, and from now on the におけるpowerful なpositive control is possible with control.そこで,本クロ-ンの発appearsをindexとして,Now,そのstructural explanation にしのぎがけずられているin ward type, and ATP dependencyには, そのstructural が我々の手によりclarification in the coming year, されることがlook forward to される.

项目成果

Y.Seko et.al: "Expression of Major Histocompatibility Complex Class I Antigen in Marie Venorialar Myoaytes Intected with Coxsackie virus B_3." Circ.Res. 67. 360-367 (1990)

Y.Seko 等人：“感染柯萨奇病毒 B_3 的玛丽静脉肌细胞中主要组织相容性复合物 I 类抗原的表达”。

M.Kmoーo et.al: "cDNA clomng of a Myosn Heavy Chaih Isoform in Embryomc Smooth Muscle and its Expresion durchg Vasculan Deselopment and in Artenoscleros" J.Biol.Chem.

M.Kmoo 等人：“胚胎平滑肌中 Myosn Heavy Chaih 同种型的 cDNA 克隆及其在血管发育和动脉硬化中的表达”J.Biol.Chem。