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癌細胞の増殖機序と情報伝達系の解析-蛋白リン酸化酵素による基質蛋白を中心に-

解析癌细胞的生长机制和信息转导系统 - 聚焦蛋白激酶的底物蛋白 -

基本信息

批准号：
01570664
负责人：
桜田恵右
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

[目的]細胞の癌化には癌遺伝子の活性化と遺伝子産物の質的、量的異常と考えられ、又遺伝子産物の多くはプロティンキナ-ゼ(以下PK)活性を示す。我々は癌細胞のモデルとして白血病細胞につきPKの相互関連、発現様式や内在性基質を解析することを目的とした。[対象と方法](1)対象は症例の白血病細胞ならびに当科で樹立したCML由来白血病細胞株(MC3)、Ph^1(+)ALL細胞株(TOMI)などである。(2)方法各種PK活性はNishizuka、Swarupらの方法に準じ、蛋白質定量はBradford法によった。リン酸化蛋白質はKatohらの方法に準じてオ-トラジオグラムで検討した。[結果と考察](1)慢性骨髄性白血病症例の白血病細胞のチロシンキナ-ゼ活性(TPK)を細胞質画分と膜画分に分けると、細胞質画分が高値であり、これは急性転化症例でも同一であった。このことはTPK活性は主に膜画分に存在しているとする報告とは異なるものであった。(2)一方CML由来細胞株では症例とは異なり、膜画分が高値であり、分化誘導剤によっても分布に差はなかった。臨床例との分布の差はTPKの作用機作が夫々の細胞で異なることを示唆している。(3)MC3とTOM1は同じくPh^1陽性細胞であるが、MC3の細胞増殖はTPK阻害剤のハ-ビマイシンによって軽度の抑制しか受けないのに対し、TOM1の増殖は同一濃度で著しく抑制された。同時に測定したTPK活性はMC3では約1/2に低下したが、TOM1では活性は認められず、CPK活性は保持されていた。このことはより未分化な白血病細胞とある程度分化したリンパ球系白血病細胞のTPKへの依存度の相違によるのかもしれない。(4)TPKによるリン酸化蛋白質は28、34、44、50、62、79、100、130、170Kが、みられたが、阻害剤処理後には主に34、100、130Kであった。(5)以上より、白血病細胞の増殖、分化にはPK-CおよびT-PKが密接に関連し、PK-CとT-PKとは細胞種や分化度により発現様式が異なることが示唆され、さらに検討中である。

[Objective] To investigate the activity of oncogene and the quantitative and qualitative abnormalities of oncogene products in cell carcinogenesis and to demonstrate the activity of oncogene products. We aim to analyze the relationship between PK and cancer cells, and the development of intrinsic stroma. [Methods](1) To establish CML derived leukemia cell line (MC3) and Ph^1(+)ALL cell line (TOMI) according to the leukemia cell line of each patient. (2)Methods Various PK activities were determined by Nishizuka, Swarup and Bradford methods. The method of acidifying protein against Katoh is described in detail below. [Results](1) Cytoplasmic and membrane fractions of leukemia cells in chronic osteoblastic leukemia patients were higher than those in acute leukemia patients. The TPK activity was detected in the cell wall. (2)A CML derived cell line is characterized by high differentiation rate, low differentiation rate, and low differentiation rate. The distribution of TPK in clinical cases is different from that in cells. (3) MC3 and TOM1 had the same effect on Ph^1 positive cells, MC3 cell proliferation was inhibited by TPK inhibitor, and TOM1 proliferation was inhibited by TOM 1 inhibitor at the same concentration. At the same time, the activity of TPK was about 1/2 lower than that of TOM1, and the activity of CPK was maintained. The degree of differentiation of undifferentiated leukemia cells is different from the degree of TPK dependence of myeloid leukemia cells (4) Acidified protein after TPK treatment at 28, 34, 44, 50, 62, 79, 100, 130, 170K, 100, 130 K, 130 K, 130 K, 100, 130K. (5)The above results show that the proliferation and differentiation of leukemia cells are closely related to PK-C and T-PK, and PK-C and T-PK are closely related to the differentiation of leukemia cells.