癌細胞の増殖機序と情報伝達系の解析-蛋白リン酸化酵素を中心に-

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(目的)細胞の癌化には癌遺伝子の活性化および遺伝子産物の質的、量的異常の関与が明らかにされている。遺伝子産物の多くはプロティンキナーゼ(以下PK)活性を示すが、癌細胞の増殖、分化における各種PKの相互の関連や発現機序には不明の点が多い。われわれは癌細胞のモデルとしての白血病細胞につきPKの相互関連、発現様式や内在性基質を解析することを目的とした。(対象と方法)(1)対象は症例の白血病細胞、ヒト培養白血病細胞(HL-60、K562、MT-1など)とEJ-H-ras導入マウス線維芽細胞とそのflat ravertant RIの増殖期のものを用いた。(2)方法;各種PK活性測定はNishizuka's Kuoらの方法に準じ、蛋白質定量はBrandford法によった。リン酸化蛋白はKatohらの方法に準じ、オートラジオグラムで検討した。(結果と考察)(1)症例の白血病細胞、培養細胞、EJ-ras/NIHおよびRI細胞のPK活性はPK-C(Cキナーゼ)が主たるPKであり、次いでチロシンPK(T-PK)であったが、A-PK、G-PK、カルモデュリン-PKは極めて低値であった。ATL由来のMT-1ではいずれのPKも検出し難かった。(2)MT-1以外の各種細胞はPK-C阻害剤および阻害因子により、増殖は抑制され、DNA合成も阻害された。更にHL-60などでは、T-PK阻害剤により増殖は抑制されたが、PK-C活性は保持されていた。従って細胞の増殖や分化ではPK-CとT-PKは異なった発現様式にあることが示唆された。(3)内在性基質蛋白では、PK-Cにより80K、40K、36K、33Kなどがリン酸化され、EJ-ras/NIHでは40K、36Kが特徴的であった。T-PKでは110Kのリン酸化がみられ、PK-CとT-PKでは細胞増殖での基質蛋白の異なることも示唆された。(4)以上より、白血病細胞の増殖、分化にはPK-CおよびT-PKが密接に関連し、PK-CとT-PKとは細胞種や分化度により発現様式が異なることが示唆され、更に検討中である。