日本人ブル-ム症候群の分子的欠陥

日本布卢姆综合征的分子缺陷

• 批准号: 02151030
• 负责人: 巽 紘一
• 金额: $ 4.99万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02151030/
• 关键词: ブル-ム症候群; DNAリガ-ゼ; pZ189; 宿主回復; PCR; ポリADP・リボ-ス

SCE高値を示すブル-ム症候群(Bloom's syndrome;BS)リンパ芽球様細胞(LCL)の粗抽出液に含まれるDNAリガ-ゼ総活性と、これからHAカラムクロマトグラフィ-により分離できたリガ-ゼIの活性をそれぞれ測定した。昨年度にユダヤ人患者由来GM3403ではリガ-ゼI活性が正常対照の2分の1に減少しているのに対し、日本人患者由来BSL2KAでは正常人対照と差異を認めず、一方総活性は3403、2KA共に正常より1.5倍高いことを見出したが、新たに検索した他の3例の日本人BSLCL、F04、F05、F07ではリガ-ゼIが正常人の2分の1であり、総活性は同じ(F04)か低下(F05、F07)していた。標的遺伝子SupF内に新しくAvaIsiteを作成した改変シャトル・ベクタ-pZ189を用いて、当該制限酵素切断後のhost cell reactivation(宿主回復)と再結合後の突然変異頻度をBSLCLと正常人LCLで比較した。2KA、04、05、07と正常人対照LCLはAvaI切断後のpZ189生存率は共に約5%で、突然変異頻度は約70%だが有意差は認めなかった。合成プロ-ブを用いたスクリ-ニングでヒト・グリオ-マcDNAライブラリ-から、2個のクロ-ンを得た。PCRでリガ-ゼI活性中心から3'側に460bp長の産物を得て、次にこれをプロ-ブにヒト・ゲノムクロ-ニング及びBSLCL、正常LCLのRFLPを解析中である。ポリ(ADP・リボ-ス)シンセタ-ゼ、グリコヒドロラ-ゼ、ホスホジエステラ-ゼ、ADP・リボシルプロテインリア-ゼの4酵素活性が上記BSLCLと正常人LCL間に顕著な(2.5倍以上の)差異を示さなかった。

High SCE values indicate Bloom's syndrome (BS), and the activity of DNA in crude extracts from LCL cells is measured. In the past year, the Japanese patients from GM3403 were found to have decreased activity by 2 points compared with normal controls, and the Japanese patients from BSL2KA were found to have decreased activity by 2 points compared with normal controls. The Japanese BSLCL, F04, F05, F07 were found to have decreased activity by 2 points compared with normal controls. All activity is the same (F04) and low (F05, F07). The new AvaIsite in the target gene SupF is created and modified to use the host cell reactivation(host reply) after the restriction enzyme is cut off and the sudden frequency of changes after recombination. The BSLCL is compared with the LCL of normal people. 2KA, 04, 05, 07: Normal people compared with LCL AvaI cut off pZ189 survival rate of about 5%, sudden change frequency of about 70%, intentional difference to recognize The combination of the two genes is obtained by using the gene sequence. PCR analysis of RFLP of 460bp from the 3'side of the active center of PCR was carried out. The activity of four enzymes in BSLCL was significantly different (more than 2.5 times) among normal subjects.

项目成果

Takahashi,T.et al.: "βーglucosidase activity in liver,spleen and brain in acute neuropathic Gaucher disease" Brain & Development. 12. 202-205 (1990)

Takahashi, T. 等人：“急性神经性戈谢病中肝脏、脾脏和大脑中的 β-葡萄糖苷酶活性”《Brain & Development》，12. 202-205 (1990)。

Arita,I.et al.: "Evidence for spontaneous conversion of Mex^ー to Mex^+ in human lymphoblastoid cells" Carcinogenesis. 11. 1733-1738 (1990)

Arita, I. 等人：“人淋巴母细胞中 Mex^ー 自发转化为 Mex^+ 的证据”致癌作用。11. 1733-1738 (1990)

巽 紘一: "ヒト培養細胞および染色体診断マニュアル" 講談社 サイエンティフィック, 182 (1990)

辰巳浩一：《人类培养细胞和染色体诊断手册》讲谈社科学，182（1990）

Sawai,M.et al.: "Reversible G_1 arrest in the cell cycle of human lymphoid cell lines by dimethyl sulfoxide" Experimental Cell Research. 187. 4-10 (1990)

Sawai,M.et al.：“二甲亚砜对人淋巴样细胞系细胞周期的可逆 G_1 阻滞”实验细胞研究。

Saito,I.et al.: "Cloning of a fullーlength cDNA encoding bevine thymus poly(ADPーribose)synthetase:evolutionarily conserved segments and thier potential functions" Gene. 90. 249-254 (1990)

Saito, I. 等人：“编码牛胸腺聚（ADP-核糖）合成的全长 cDNA 的克隆：进化上保守的片段及其潜在功能”Gene。 90. 249-254 (1990)