ヒト細胞における放射線誘発突然変異感受性の再評価

人类细胞辐射诱发突变易感性的重新评估

• 批准号: 03680182
• 负责人: 巽 紘一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03680182/
• 关键词: γ(X)線; 末梢血管拡張性運動失調症; DAP抵抗性変異; フレ-ムシフト; 1CR 191; サザ-ン・ブロット; 異型接合性喪失; 相同組換え体

γ(X)線の細胞致死作用に高感受性である末梢血管拡張性運動失調症(ataxia telangiectasia,AT)患者由来リンパ芽球様細胞が6TG抵抗性変異(X染色体上のHPRT遺伝子に起こる変異)について正常人由来細胞と変異誘発作用が大きく違わないことが判っているが、常染色体16番上のAPRT遺伝子での変異を検出するDAP抵抗性変異に関しても果して差がないのかを明らかにしようとした。予めAPRT制限酵素多型について2.5kb、3kbの異型接合であることを確認済みのATP1ー1細胞を特異的フレ-ムシフト(点突然変異の一つ)誘発剤の1CR 191 0.5μM、24hrの処理を行ったところ、4.9×10^<-5>の高率にDAP100μM抵抗性変異体が得られた。得られた変異体クロ-ン(7つ)のサザ-ン・ブロットではすべて3.0kbか2.5kbの何れかのみが残存する異型接合性喪失(LOH)を示し、AT細胞では正常遺伝子座位喪失につながる様な欠失、組換え、染色体不分離などのゲノム変化がきわめて頻繁に起こっていることが示唆された。すでにaprtである2.8DHA尿路結石症保因者由来細胞で+/-→-/-の自然突然変異は約10^<-5>であることが判明しているので、正常人由来細胞におけるaprt+/+→-/-あるいは-/0への変異は10^<-5>×10^<-5>=10^<-10>よりは高くないと予想される。従って、APRT正帯対立遺伝子が消失しやすいゲノム不安性がATiーi細胞の固有の性質と考えられた。APRT遺伝子のexon3にEcoーgpt遺伝子をプロモ-タ-、ポリA配列と共にtandemに導入して失活APRT遺伝子を作成した。これを電気穿孔法で6TG抵抗性AT1ー1細胞に導入し相同組換え体を得るべく努力中である。

γ(X) line pursuant cell lethal effect に hypersensitivity である peripheral vascular 拡 ataxia Telangiectasia, ats) origin リ ン パ gemmule が tg resistance - 6 different others in cells (X chromosome の HPRT heritage 伝 son に up こ る variations) に つ い と origin て normal cells - different role 発 が lure big き く violations わ な い こ と が convicted っ て い る が, often on chromosome 16 times の APRT heritage 伝 son で の - different を 検 す る DAP resistance - different に masato し て も fruit し て poor が な い の か を Ming ら か に し よ う と し た. The limitations to the め APRT enzyme polymorphism に つ い て 2.5 KB, 3 KB の heterozygosis で あ る こ と を confirm 済 み の ATP1 ー 1 cell を specific フ レ - ム シ フ ト suddenly - different の a つ (point) induced 発 tonic の cr 1 191 0.5 mu M, 24 hr の 処 bedding line を っ た と こ ろ, 4.9 * 10 ^ < 5 > の high rate に DAP100 microns resistance - variant が must ら れ た. Have ら れ た - variant ク ロ - ン (7 つ) の サ ザ - ン · ブ ロ ッ ト で は す べ て 3.0 KB か 2.5 KB の what れ か の み が residual す る loss of heterozygosity (LOH) を し, AT cell で は normal heritage 伝 lost child seat に つ な が る others な owe loss, group in え, chromosome nondisjunction な ど の ゲ ノ ム variations change が き わ め て に up frequently Youdaoplaceholder0 って る る とが とが された. す で に aprt で あ る 2.8 DHA urinary stones disease insurance because of the origin of cells で + / - - - / - の natural suddenly - different は about 10 ^ 5 < - > で あ る こ と が.at し て い る の で origin, normal cells に お け る aprt + / + and - / - あ る い は - / 0 へ の - different は 10 ^ < - > 5 x 10 ^ ^ < 5 > = 10 <-10>よ くな くな gao くな と yu xiang される. Youdaoplaceholder0, APRT positive zone pair 伝 offspring が disappearance <s:1> やす ゲノム ゲノム restability がATi <s:1> i cell <s:1> inherent <s:1> properties と study えられた. APRT posthumous son 伝 の exon3 に Eco ー GPT heritage 伝 son を プ ロ モ タ -, ポ リ A match column と total に tandem に import し て inactivation APRT heritage 伝 son を made し た. <s:1> れを electrical perforation method で 6TG-resistant AT1 <s:1> 1 cells に were introduced into the same group of え bodies を るべく in the るべく effort である.

项目成果

Tatsumi,K.et al.: "Transition of phenotypic dimorphism with regard to spontaneous sister chromated exchange in Bloom's syndrome lymphoblastoid cell lines." Japanese Journal of Cancer Research.

Tatsumi,K.等人：“布卢姆综合征淋巴母细胞系中自发姐妹铬酸盐交换的表型二态性转变。”

Fujimori,A.et al.: "Allelic losses in mutations at APRT locus of human lymphoblastoid cells." Mutation Research.

Fujimori,A.et al.：“人淋巴母细胞 APRT 位点突变中的等位基因丢失。”

Kurihara,T.et al.: "Two types of DNA ligase I activity in lymphoblastoid cells from patients with bloom's syndrome." Japanese Journal Cancer Research. 82. 51-57 (1991)

Kurihara,T.et al.：“布卢姆综合征患者的类淋巴母细胞中存在两种类型的 DNA 连接酶 I 活性。”