SV40トランスフォ-ム細胞特異的膜タンパク質cDNAの分離とその機能

SV40转化细胞特异性膜蛋白cDNA的分离及其功能

• 批准号: 02152024
• 负责人: 山口 宣生
• 金额: $ 4.1万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02152024/
• 关键词: SV40; トランスフォ-ム; 膜抗原; cDNAクロ-ニング; 動物細胞発現ベクタ-; パニング; cDNAライブラリ-; モノクロ-ナル抗体

浸潤・転移・異常増殖など癌細胞特有な形質は、細胞膜の変化に起因すると考えられる。したがって、癌細胞膜に特異的に発現するタンパク質の遺伝子を単離してその機能を解析することは、発癌機構の理解のみならず癌の診断・治療において重要である。DNA型腫瘍ウイルス・SV40でトランスフォ-ムした細胞には、移植拒否抗原など多くの膜表面抗原が出現する。本研究は、SV40トランスフォ-ム細胞に特異的な膜タンパク質cDNAの単離とその機能解析を目的としている。SV40トランスフォ-ムハムスタ-細胞の特異的膜抗原に対するモノクロ-ナル抗体(25Ab)を用いて、抗原タンパク質のcDNAクロ-ニングを試みた。SV40トランスフォ-ム細胞の25Ab抗原量をFACSで測定し、同抗原を大量に発現するハムスタ-細胞・B6株を分離した。25Abを用いてB6細胞とCOS細胞のパニングを行った結果、B6細胞のみが選択的に濃縮される。これはCOS細胞と25Abを組み合わせるパニングで目的の抗原遺伝子cDNAの分離が可能であることを示している。そこで、我々の開発した動物細胞発現ベクタ-を用いて作製したB6細胞cDNAライブラリ-(鎖長1.5kb以上で約900万の独立なクロ-ンからなる)をCOS細胞に遺伝子導入して25Abによるパニングを行なっている。さらにB6細胞を用いて膜抗原に対するポリクロ-ナル抗体の作製を行った。これを用い25Ab以外の特異的膜抗原cDNAの単離を予定している。トランスフォ-ム細胞に特異的な膜タンパク質cDNAの網羅を目的として、CD4やヒトILー2受容体抗原決定基をアミノ末端側にもつキメラcDNAライブラリ-をSV40トランスフォ-ムラット細胞のmRNAから作製し、cDNA迅速検索法やパニング法で膜タンパク質をコ-ドするcDNAのスクリ-ニングを行っている。

Immersion transfer often results in the specific shape of the cell and the cause of cell membrane metaplasia. The characteristics of the cell membrane of cancer and cancer can be analyzed and the cancer mechanism can understand the importance of the treatment of cancer. DNA type antigen, SV40 antigen, cell antigen, transplant rejection antigen, membrane surface antigen were detected. The purpose of this study is to analyze the purpose of this study, and the purpose of this study is to analyze the purpose of this study, which is based on the characteristics of the membrane, the SV40, the cDNA, the cell, the membrane, the membrane, the cell, the cell, the cell The specific membrane antigen (25Ab) of SV40 was detected by antigen, antigen, cDNA antibody (Elisa). The amount of SV40 antigen was determined by FACS assay, and the B6 strain was isolated from the same antigen by FACS assay. 25Ab uses the results of the COS cell selection of the B6 cell, and the selection of the B6 cell selection. The target COS cell 25Ab may show that the target antigen cDNA is isolated from each other. We do not need to use this device to make sure that the B6 cell cDNA is loaded. (the length of the 1.5kb is more than 9 million independent cells.) the COS cell operator is registered in the local 25Ab health care system. The anti-B6 cell was used as an antibody against membrane antigen. The specific membrane antigen (cDNA) other than 25Ab was used to predetermine the antigen. The target of the cDNA network is the destination of the membrane. The receptor antigen of the CD4 is IL. The antigen of the acceptor determines the end of the cell. The antigen of the acceptor determines the end of the cell. The end of the cell is not affected by the SV40 antigen. The mRNA of the cell, the mRNA,

项目成果

Kim,D.W: "Use of the human elongation factor 1 promoter as a versatile and efficient expression system." Gene. 91. 217-223 (1990)

Kim,D.W：“使用人类延伸因子 1 启动子作为多功能且高效的表达系统。”