分離基質小胞の生活歯髄切断への応用(器官培養歯髄面へ移植した基質小胞の動態)

分离基质囊泡在活体牙髓切片中的应用（基质囊泡移植到器官培养牙髓表面的动力学）

• 批准号: 02807175
• 负责人: 林 善彦
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02807175/
• 关键词: 基質小胞; 生活歯髄切断; 器官培養

分離した基質小胞を生活歯髄切断時に応用した場合の切断面に植移された基質小胞の動態をとらえるため、以下の基礎実験を行った。第1番目に、基質小胞を任意の時に任意の量収穫する系を確立するための実験を行った。ラットの根尖部歯髄を酵素処理し、歯髄細胞を分離したのち、継代培養の可能となった細胞系を樹立した。この細胞系は、酵素処理ののち分画遠心を行うと、生体内でみられる場合と形態的に同一の基質小胞を得ることができる。さらに、この基質小胞画分を有機リン酸を含む培地で培養すると、培養3日目より基質小胞に接して結晶形成の生じることも明らかとなった。以上の結果から、使用したラット歯髄細胞系は基質小胞を産生し、また、この基質小胞は石灰化能を有していることになる。この細胞系を使えば、希望する量の基質小胞を得ることが可能であるので、今後、基質小胞の移植実験に応用できる。第2番目に、歯髄を器官培養する培合の培養条件を決定するための実験を行った。ラットの切歯から無菌的に歯髄を取り出したのち、長さ約1mmに切断した。この歯髄小片を、レンズペ-パ-をのせた金網上にのせ、DMEM培地(10%血清添加)中で5%CO_2下にて培養した。1、3、5日後、通法により組織標本を作製後、光顕、電顕的に観察した。1日目では、一部正常な細胞はみられたが、大多数の細胞は核の濃縮、細胞質内にミエリン様構造物の出現等、壊死変化を呈していた。3日、5日と培養時間が長くなるに従い壊死変化は強くなった。今後は、器官培養時、添加する血清濃度を上げるなど培地の条件、及びO_2濃度を上げるなど培養器の条件を変え、最低3日目までは、正常な組織像の得られる条件を検討する必要性が判明した。このことによって、器官培養された歯髄組織内における移植基質小胞の動態をとらえることが可能になると思われる。

When separating matrix cells, the cutting surface is used to transplant matrix cells, and the following basic conditions are used. In the first paragraph, the matrix cell is arbitrarily obtained at any time, and the system is established. The root tip enzyme treatment, cell isolation, and cell culture are possible. These cell lines are processed by enzymes and isolated from cells. In vivo, cells are isolated from cells of the same matrix. In addition, the matrix cells were cultured in the presence of organic acids for 3 days. The above results show that the cell lines used in this study can produce stroma cells, and that the stroma cells can be calcified. This cell line is expected to be available in sufficient quantities for possible and future use in stromal cell transplantation. The second step is to determine the culture conditions for organ culture. Cut off the sterile teeth and cut them off about 1mm in length. The cells were cultured in DMEM medium (10% serum added) under 5% CO_2. 1, 3, 5 days later, after the organization of the law, light, electricity inspection On the 1st day, a part of normal cells were concentrated, most of the cells were concentrated, and the cytoplasmic structures appeared. 3 days, 5 days culture time In the future, it is necessary to investigate the conditions for organ culture, serum concentration, culture medium and O_2 concentration, and the conditions for obtaining normal tissue images. The dynamics of transplanted stroma cells in tissue culture and organ culture may be related to the development of organ culture.

项目成果

Y.Hayashi: "Matrix Vesicles and Crystal Formation by Rat Pulp Cells In Vitro" Bone and Mineral (Special Issue). (1992)

Y.Hayashi：“体外大鼠牙髓细胞的基质囊泡和晶体形成”骨骼和矿物质（特刊）。