分子生物学的手法を用いて腎症候性出血熱の診断法及びワクチン開発

肾症状性出血热的分子生物学诊断方法及疫苗研制

• 批准号: 02557025
• 负责人: 山西 弘一
• 金额: $ 9.09万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1992
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02557025/
• 关键词: 組み換えワクチン; Mセグメント; タンパク質発現; Lセグメント; RNA依存RNAポリメラーゼ; HFRS; PCR; ハンタウイルス

本年度は組み換えワクチン作製に際しての基礎的データを得るためにワクチニアウイルスと動物細胞の発現ベクターを用いてMセグメントの培養細胞での発現を行った。更にハンタウイルスの性質を明らかにするためにB1株のLセグメントの塩基配列も明らかにした。まずワクチニアウイルスの発現系としてPAK10にMセグメントの全コーディング領域を組み込み、TK^-細胞に挿入し、ワクチニアウイルスを感染後、組み換えワクチニアウイルスのクローニングを行った。得られた組み換え体のG1やG2タンパク質のいずれの発現も認められなかった。次にかなり強力な発現ベクターpEF-BOSを用いて同じMセグメントの全コーディング領域をVeroE6中で発現させた時、ウイルス感染時と損色のない量のG1とG2タンパク質の発現が認められた。ウイルスのタンパク質が細胞毒性を示すためか、一時的な発現はできるが安定的な発現を示す細胞を得ることはできなかった。既に報告したようにハンタウイルスの持続感染細胞の中にはLセグメントの発現のみが認められるものがある。又、LセグメントはRNA依存のRNAポリメラーゼをコードしていると予測されている。そこでこのLタンパク質の発現もしくは活性を抑制することによりHFRSの治療効果が得られる可能性がある。従ってまずLタンパク質の性質を明らかにするための塩基配列を明らかにした。B1株のLセグメントは6533塩基からなり、2151アミノ酸の1本鎖のポリペプチドをコードしていた。このペプチドのほぼ中央にRNAポリメラーゼのモチーフが認められ、さらにN末近くにCAP結合タンパク質のモチーフが認められた。このことからインフルエンザウイルスと同様のメカニズムでmRNAを合成している可能性が示唆された。

This year, the basic development of animal cells and the development of cultured cells in the field of cell culture have been carried out. In addition, the properties of the B1 strain are clearly defined. The development of the virus is based on PAK10, which is the whole virus field of the virus. TK^-cells are infected with the virus, and the virus is changed. The G1 and G2 of the two groups are completely different. The second is to use the same method to detect the strong presence of pEF-BOS. The second is to use the same method to detect the strong presence of pEF-BOS. The third is to use the same method to detect the strong presence of pEF-BOS. The third is to use the same method to detect the strong presence of pEF-BOS. The fourth is to use the same method to detect the strong presence of pEF-BOS. It is the first time that the virus has been detected. In addition to the report on the occurrence of infection in infected cells, the study also found that In addition, the L-1000 RNA depends on the existence of RNA. The possibility of HFRS treatment results is discussed. The nature of the substance of the substance B1 strain L-1000 is 6533 base, 2151 base, 1 base, and 1 base. This is the first time that the CAP has been combined with the RNA in the center of the cell. The possibility of mRNA synthesis is indicated by the following:

项目成果

Y.Isegawa,Y.Fujiwara,A.Ohshima,R.Fukunaga,M.Murakami,K.Yamanishi: "Nucleotide sequence of the M genomo segment of hemorrhagic fever with renel syndrome virus strain Bー1." Nucleic Scids Research. 18. 4936 (1990)

Y. Isekawa、Y. Fujiwara、A. Ohshima、R. Fukunaga、M. Murakami、K. Yamanishi：“雷内尔综合征病毒株 B-1 出血热 M 基因片段的核苷酸序列。” .4936 (1990)

Isegawa Y,Sheng J,Sokawa Y,Yamanishi K,Nakatomi O,Yeda S.: "Selective amplification of cDNA sequence from total RNA by cassette-ligation mediated polymerase chain reaction(PCR):Application to sequencing 6.5kb genome segment of hantavirus strainB-1." Molec

Isekawa Y，Sheng J，Sokawa Y，Yamanishi K，Nakatomi O，Yeda S.：“通过盒式连接介导的聚合酶链式反应（PCR）从总RNA中选择性扩增cDNA序列：应用于汉坦病毒B株6.5kb基因组片段测序

Tamura M,Ogino S, Matsunaga T,Asada H, et al.: "Experimental labyrinthitis in guinea pigs caused by a Hantavirus." ORL. 53. 1-5 (1991)

Tamura M、Ogino S、Matsunaga T、Asada H 等人：“由汉坦病毒引起的豚鼠实验性迷路炎。”

M.Tamura,S.Ogino,T.Matsunaga,H.Asada,K.Kondo,T.Kurata,K.Yamanishi: "Experimental labyrinthitis in guinea pigs caused by a Hantavirus." Otoralyngology. 53. 1-5 (1991)

M.Tamura、S.Ogino、T.Matsunaga、H.Asada、K.Kondo、T.Kurata、K.Yamanishi：“由汉坦病毒引起的豚鼠实验性迷路炎。”