Phytolasinの活性システイン残基の化学修飾

植保素中活性半胱氨酸残基的化学修饰

• 批准号: 02640427
• 负责人: 米沢 弘夫
• 金额: --
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02640427/
• 关键词: Phytolasin; Papain; ^3HーTPCK; 活性システイン残基

昨年までにアメリカヤマゴボウより単離されたPhytolasinはシステインプロテア-ゼであり,TPCKによって阻害される事が明らかにされていた。今年度はTPCKの結合部位を調べるために, ^3Hでラベルされた ^3HーTPCKを合成した。Phytolasinと,その対照として,代表的なシステインプロテア-ゼであるPapainとに ^3HーTPCKを作用させ,プロテア-ゼの残存活性と ^3HーTPCKとの結合量を調べた。その結果,プロテア-ゼに対して20倍モルの ^3HーTPCKを作用させると,両酵素とも完全に失活し,その時の ^3HーTPCKの結合量はPhytolasinでは1:0.85,Papainでは1:0.78であった。システインプロテア-ゼの不安定性を考慮すると,これは両酵素とも,酵素1分子に対し,1分子のTPCKが結合した事を示すと考えられる。さらに, ^3HーTPCKの結合部位を明らかにするために, ^3HーTPCKで処理したPhytolasin,Papainを還元ピリジルエチル化した後,プロテア-ゼ消化を行なった。消化物を購入したHPLCにかけ,放射能を持つペプチド断片の単離を行なった。まだ放射性断片の精製が完全に終わっておらず, ^3HーTPCKの結合部位を明らかにするまでには至っていない。一方,Phytolasinの一次構造の解明を行ない,かなりの部分のアミノ酸配列を明らかにすることができた。それによるとPhytolasinはPapainス-パ-ファミリ-に属する事が明らかになっている。その活性システイン残基近傍の構造もすでに判明しており, ^3HーTPCKの結合部を明らかにする上で,大きな寄与が期待できる。 ^3HーTPCkの結合部位は活性システイン残基であると予想しているが,ヒスチジン残基である可能性も残されている。あと数ケ月中に ^3HーTPCKの結合部位を同定できるものと考えている。

In the past, Phytolasin has been used as a catalyst for the development of new technologies. This year, the binding site of TPCK was adjusted, and the TPCK was synthesized. Phytolasin is a compound of TPCK and TPCK. As a result, the enzyme was completely inactivated, and the binding amount of TPCK was 1: 0.85 for Phytolasin and 1:0.78 for Papain. The enzyme is not stable. The binding site of TPCK was determined by the method of digestion. Digest is purchased by HPLC, radioactivity is collected by HPLC and separated by HPLC. The purification of radioactive fragments is complete, and the binding sites of ^3H-TPCK are clearly defined. A party,Phytolasin's primary structure of the solution to the problem, the part of the acid allocation to the problem "Phytolasin" is the most common type of drug in the world. The structure near the active residues was identified, and the binding site of ^3H-TPCK was identified. The binding site of 3H-TPCk is the active residue. The binding site of TPCK is determined by the number of times.