抗ペプチド抗体を用いたグルコ-ス輸送体局在と血液関門との関係の解析

利用抗肽抗体分析葡萄糖转运蛋白定位与血屏障的关系

• 批准号: 02670017
• 负责人: 高田 邦昭
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670017/
• 关键词: 血液ー組織関門; グルコ-ス輸送体; 血液ー脳関門; 内皮細胞; 上皮細胞; GLUT1; ラット; 細胞膜

生体内には、脳をはじめとして、血液と組織細胞との物質交換が必ずしも自由には行われない、いわゆる「血液ー組織関門」の存在する組織がある。この関門部をグルコ-スがどのような機構により通過しているかを検討するため、細胞膜蛋白質であるグルコ-ス輸送体に注目し、その局在分布を検討した。促進拡散型グルコ-ス輸送体は、現在までに5つのisoforms(GLUT1ーGLUT5)が知られている。今回はヒト赤血球膜グルコ-ス輸送体分子を抗原として作製した抗体と、HepG2グルコ-ス輸送体C末の合成ペプチドに対する抗体の2種を用いて、GLUT1(赤血球/HepG2型グルコ-ス輸送体)の分布を検索した。SpragueーDawley系ラットから各種組織を取り出しイムノブロット法と凍結切片の免疫組織化学染色によりGLUT1を検索した。閉鎖帯によって結合された血管内皮細胞を有する血液ー組織関門部(脳、網膜、虹彩、未梢神経)では内皮細胞がGLUT1陽性であった。陽性部位は細胞膜の全周にわたった。一方、血液ー組織関門の存在しない組織の内皮細胞細胞膜はGLUT1陰性であった。閉鎖帯によって結合された上皮細胞が血液ー組織関門を形成する場合(網膜色素上皮、毛様体、脈絡叢、末梢血管神経周膜)では、関門をなす上皮細胞細胞膜がGLUT1陽性であった。また胎盤関門を形成する合胞体性栄養膜の細胞膜もGLUT1陽性であった。このように、GLUT1グルコ-ス輸送体は血液ー組織関門部に豊富に存在し、グルコ-スの関門通過を司っていると思われる。今後は、他の4つのisoforms(GLUT2ーGLUT5)の存在の有無についても検討を加えていきたい。

Born in vivo に は, 脳 を は じ め と し て, blood と tissue と の material exchange が will ず し も free に は line わ れ な い, い わ ゆ る "blood ー masato door" の exist す る organization が あ る. こ の masato door of を グ ル コ - ス が ど の よ う な institutions に よ り through し て い る か を beg す 検 る た め, cell membrane protein で あ る グ ル コ - ス conveying body に attention し, そ の bureau in distribution を beg し 検 た. Promote company, dispersion type グ ル コ - ス conveying body は, now ま で に 5 つ の isoforms (GLUT1 ー GLUT5) が know ら れ て い る. Today back to は ヒ ト red blood cell membrane グ ル コ - molecular を ス conveying body antigen と し て cropping し と た antibody, HepG2 グ ル コ - ス conveying body at the end of the C の synthetic ペ プ チ ド に す seaborne る antibody の two を with い て, GLUT1 (red blood cell/HepG2 グ ル コ - ス conveying body) の distribution を 検 cable し た. Sprague wrote ー Dawley department ラ ッ ト か ら organizations take り out し を イ ム ノ ブ ロ ッ ト method と frozen section の immunohistochemical staining に よ り GLUT1 を 検 cable し た. Atresia 帯 に よ っ て combining さ れ た endothelial cells を す る blood ー masato portal vein (脳, retina, iris, not sought god 経) で は endothelial cells が GLUT1 positive で あ っ た. The positive site crosses the entire nucleus of the cell membrane にわたった. One party, the blood <s:1> tissue gate <e:1> has a な な tissue <s:1> endothelial cell membrane that is <s:1> GLUT1 negative であった. Atresia 帯 に よ っ て combining さ れ た epithelial cells が blood ー masato door を form す る occasions (retinal pigment epithelium and others in the body, choroid plexus and peripheral vascular god 経 weeks film) で は, masato door を な す epithelial cell membrane が GLUT1 positive で あ っ た. The また placental gate を forms する syncytial 栄 membrane-forming <s:1> cell membrane is GLUT1-positive であった. こ の よ う に, GLUT1 グ ル コ - は ス conveying body blood ー masato door of に aboundant に し, グ ル コ - ス の masato door by を department っ て い る と think わ れ る. Future は, he の 4 つ の isoforms (GLUT2 ー GLUT5) の is の presence of に つ い て も を 検 please add え て い き た い.

项目成果

Takata K: "Use of fluoresceinーphalloidin and DAPI as a counterstain for immunofluorescene microscopic studies with semithin frozen sections." Acta Histochem Cytochem. 23. 679-683 (1990)

Takata K：“使用荧光素-鬼笔环肽和 DAPI 作为半薄冰冻切片免疫荧光显微镜研究的复染剂。” Acta Histochem Cytochem 23. 679-683 (1990)

Takata K: "Localization of Na^+ーdependent active type and erythrocyte/HepG2ーtype glucose transporters in rat kidneyーーーーimmunofluorescence and immunogold study." J Histochem Cytochem. 39. 287-298 (1991)

Takata K：“大鼠肾脏中 Na^+ 依赖性活性类型和红细胞/HepG2 型葡萄糖转运蛋白的定位 - 免疫荧光和免疫金研究。” J Histochem Cytochem。 39. 287-298 (1991)

Takata K: "Erythrocyte/HepG2ーtype glucose transporter is concentrated in cells of bloodーtissue barriers." Biochem Biophys Res Commun. 173. 67-73 (1990)

Takata K：“红细胞/HepG2 型葡萄糖转运蛋白集中在血液组织屏障的细胞中。”Biochem Biophys Res Commun。173. 67-73 (1990)

Takata K: "Localization of two types of glucose transporters in rat kidney." Acta Histochem Cytochem.

Takata K：“大鼠肾脏中两种类型的葡萄糖转运蛋白的定位。”

高田 邦昭: "グルコ-ス輸送体。血液ー組織関門におけるグルコ-ス輸送。" Mebio. 8(3). 133-135 (1991)

Kuniaki Takada：“葡萄糖转运蛋白。血液组织屏障的葡萄糖转运。” 133-135 (1991)。