補体第7成分(C7)の分子遺伝学的研究

补体成分 7 (C7) 的分子遗传学研究

• 批准号: 02670442
• 负责人: 上田 一博
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670442/
• 关键词: C7欠損症

補体第7成分(C7)欠損の家系に対しサザンブロッティングによる遺伝子解析、ノ-ザンブロッティングによるmRNAの解析、及び蛋白の測定を行った。遺伝子の解析は、末梢血白血球よりDNAを抽出し、サザンブロッティングにより行った。制限酵素としてEco R I,Pst I,Taq Iの3種類を使用して解析したが、3種類共正常コントロ-ルと同じ泳動パタ-ンを示し、遺伝子の欠損や遺伝子の突然変異を示唆する泳動度の違うバンドの出現はなく、今回検索した限りでは両親、患児、弟共DNAレベルでの異常は、発見出来なかった。遺伝子の欠損はないと考えられたので、C7蛋白の欠損が、mRNAへの転写の欠損によるものか、mRNAから蛋白への転写の異常によるものかを現在検索中である。補体蛋白は主に肝臓で産生されるが、末梢血単球も補体を産生することが知られており、患者への負担が少ない末梢血単球を材料としてC7mRNAの出現の有無を調べるため、正常コントロ-ルの末梢血単球がC7mRNAを発現させる培養条件を探すため、さまざまな条件で末梢血単球を培養、刺激しtotal cellular RNAを抽出、ノ-ザンブロッティング後C7cDNAをプロ-ベとしてハイブリダイゼ-ション後X線フィルムに露光しC7mRNAの出現の有無を調べた。C2、C3、C4については末梢血単球のmRNAの検出できる条件が報告されているが、C7については現在のところ報告がなく検討中である。培養条件として、培養液を無血清、20%FCS、10%human serum RPMI 1640の3条件、培養時間として24、72、120時間の3条件、単球への刺激としてLPS,ILー1β,ILー6、TNF α、IFNーγの5種類を試しているがいずれもC7mRNAを検出できておらず、末梢血単球でC7mRNAを検出できる条件を検討している。

Complement 7 component (C7) deficiency in the family, for example, the analysis of gene expression, the analysis of mRNA expression, and the determination of protein expression. DNA extraction from peripheral blood leukocytes and analysis of DNA The three types of restriction enzymes Eco RI,Pst I,Taq I are used to analyze, analyze, C7 protein deficiency, mRNA protein deficiency, protein deficiency. Complement protein production in the liver, complement production in the peripheral blood, complement protein production in the liver, complement protein production in the peripheral blood, complement protein production in the C7 mRNA expression was modulated by X-ray after the gene mutation. C2, C3, C4, C7, C8, C9, C10, C11, C12, C13, C14, C15, C16, C17, C18, C19, C10, C11, C11, C12, C11, C12, C13, C12, C13, C14, C12, C13, C14, C15, C16, C17, C18, C19, C10, C10, Culture conditions: serum-free culture medium, 20% FCS, 10% human serum RPMI 1640, culture time: 24, 72, 120 hours, single cell stimulation, LPS,IL-1β,IL-6, TNF α, IFN γ, 5 types of C7mRNA, peripheral blood C7mRNA.