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カリシウム・リン脂質結合蛋白(CPBs)の活性ドメインおよび胎盤での発現について

钙磷脂结合蛋白（CPB）的活性结构域及其在胎盘中的表达

基本信息

批准号：
02670730
负责人：
村田誠
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670730/
关键词：
Calphobindin カルシウム・リン脂質結合蛋白 annexin phospholipase inhibitor mRNA

项目摘要

カルシウム・リン脂質結合蛋白(CPBs)は、我々をはじめとして種々の施設より報告され、世界的には、annexin femilyとして統一名称が使用されつつある。今回は、一つには、CPBsの抗phospholipase作用と、抗凝固活性について検討し、もう一つは、CPBーIについて、そのmRNAのnothern blottingについて基礎的に検討した。具体的には、前者では、まずCPBーI,CPBーII,CPBーIII,lipocortinにおいてのphospholipase A_2(PLA_2)およびphospholipase C(PLC)活性の抑制能を種々条件下で検討した。すなわち、至適カルシウム濃度、至適pHの異なる由来の違うPLA_2での検討、さらに、同一モル濃度における各CPBsの抑制能の比較などである。その結果を以下に示す。1)pH8.0が至適pHであるブタ膵由来のPLA_2とpH6.5であるマムシ毒由来のそれで,CPBーIでの最大抑制活性出現のカルシウム濃度は、どちらも20mMであった。一方、CPBーIIでは、どちらも10mMであった。2)ブタ膵由来のPLA_2の抑制活性は、同一モル濃度で比較し、CPBーII>CPBーI>CPBーIII>lipocortinの順であった。これは、マムシ毒由来のPLA_2でも同様の傾向を示した。さらに、抗凝固活性も同様の順を示した。3)同一モル濃度におけるPLC抑制は、CPBーI>CPBーII>CPBーIII>lipocortinの順であった。PLA_2とPLCでの差は、各々の基質であるphosphatidyl cholineとphsphatidyl inositolに対するCPBsの結合能の差と一致した結果であった。CPBsとリン脂質の結合能の結果からもふまえて考察すると、CPBsのカルシウム結合ドメインが、PLA_2,PLC,及び凝固抑制に共通した抑制活性ドメインであるものと推察された。次にCPBーI mRNAについては、胎盤組織よりRNAを抽出し、agarose電気泳動後にmenbraneに転写し、 ^<32>PをラベルしたCPBーI cDNA断片をprobeとしてhybridizationを行った。mRNA抽出、hybridizationの条件設定などで苦労したが、胎盤では約1.6kbの単一のCPBーI mRNAが証明された。

Lipid binding proteins (CPBs) are reported to be the world's most commonly used lipid binding proteins. This time, CPBs have anti-phospholipase effect, anti-coagulation activity, CPB I, mRNA and other blotting. The inhibition activity of phospholipase A_2(PLA_2) and phospholipase C(PLC) in CPB I,CPB II,CPB III and lipocortin was studied under different conditions. Comparison of the inhibition energy of CPBs at different concentrations and pH values. The results are shown below. 1) When pH 8.0 was reached to the optimum pH, the maximum inhibitory activity of CPB I occurred at a concentration of 20 mM. When pH 6.5 was reached to the optimum pH, the maximum inhibitory activity of CPB I occurred at a concentration of 20 mM. One side, CPB II, 10mM 2) CPB II>CPB I>CPB III>Lipocortin. The origin of PLA_2 and the tendency of PLA_2 and PLA_2 to change are shown. In addition, the anti-coagulation activity is also shown in sequence. 3)PLC inhibition at the same concentration is CPB I>CPB II>CPB III>lipocortin. The difference between PLA_2 and PLC was consistent with the difference between phosphocholine and phsphatidyl inositol binding energies of CPBs. The results of CPBs and lipid binding energy were investigated. CPBs and lipid binding energy, PLA_2, PLC, and coagulation inhibition activity were investigated. CPB-1 mRNA is detected in the placenta, RNA is extracted from the placenta, agarose electrophoresis is performed in the placenta, CPB<32>-1 cDNA fragments are detected in the placenta, and hybridization is performed. mRNA extraction and hybridization conditions were set up to demonstrate the presence of CPB I mRNA in the placenta, which was approximately 1.6 kb long.