腸内嫌気性細菌バクテロイデスにおける遺伝子の重複と発現

肠道厌氧细菌拟杆菌中的基因复制和表达

• 批准号: 02670987
• 负责人: 山本 勇
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hiroshima University (1991)Hokkaido University (1990)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1991
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670987/
• 关键词: バクテロイデス; グルタミン酸脱水素酵素; gdh遺伝子; Bacteroides

人期腸内嫌気性細菌Bacteroides fragilisのグルタミン酸脱水素酵素をコ-ドする遺伝子gdhのDNA塩基配列の枠組を確実にする一助としてグルタミン酸脱水素酵素のアミノ酸配列を部分的に決定することを試みた。1mM NH_4Clで培養したB.fragilisから音波破砕、イオン交換クロマトブクラフィ-、アフィニティ-クロマトグラフィ-、高速ゲル濾過により高活性型のグルタミン酸脱水素酵素を精製し、さらにHPLC装置で精製した均一蛋白と、V8プロテア-ゼで水解して得たペプチド断片の一つをプロテインシ-クエンサ-に掛けアミノ酸配列を得た。アミノ末端領域では次の26残基のアミノ酸配列が得られた: Met Asn Ala Lys Val Leu Glu Asp Leu Arg Arg Phe Pro Asn Glu Pro Glu Tyr His Gln Ala Val Glu Gluこのうち大腸菌のグルタミン酸脱水素酵素のアミノ酸配列と一致するのは12残基で46%あった。ペプチド断片では10残基のアミノ酸配列(Ser Gly Gly Lys Val Val Thr Met Ser Asp)が得られ、そのうち6残基が大腸菌の酵素の275残基目からの配列と一致した。これまでに得ている約2kbの塩基配列中に上記のアミノ酸配列をコ-ドする翻訳領域は見いだされなかった。おそらく塩基配列の読み違いがあると思われる。このため再度塩基配列のデ-タを精査するとともに、配列決定に取り組む必要がある。遺伝子発現のプロモ-タ-を代えてタンパク質の大量生産を試みたが成功していない。

The DNA base alignment of the human intestinal pathogenic bacterium Bacteroides fragilis is determined by the DNA base alignment of the plasmid gdh. 1mM NH_4Cl culture of B.fragilis, sonication, high speed filtration, purification of highly active acid dehydrin enzyme, purification of homogeneous protein, V8-hydrolysis, purification of fragments by HPLC. The amino acid sequence of 26 residues in the terminal domain was found to be Met Asn Ala Lys Val Leu Glu Asp Leu Arg Phe Pro Asn Glu Pro Glu Tyr His Gln Ala Val Glu Glu. Ser Gly Lys Val Thr Met Ser Asp is the same as Ser Gly Lys Val Thr Met Ser Asp, and Ser Gly Lys Val Thr Met Ser Asp is the same as Ser Gly Val Thr Met Ser Asp. This is about 2 kb in length and is recorded in the base sequence.おそらく塩基配列の読み违いがあると思われる。This is the first time I've ever seen you. The development of the new technology has been successfully carried out in mass production.