オンコジ-ンタンパク質との融合化によるホメオドメインタンパク質の標的遺伝子の探索

通过与癌基因蛋白融合寻找同源结构域蛋白的靶基因

• 批准号: 03152009
• 负责人: 黒岩 厚
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152009/
• 关键词: ホメオボックス遺伝子; ホメオドメインタンパク質; 転写因子; オンコジ-ン; 標的遺伝子; 形態形成

我々は、ニワトリのホメオボックス遺伝子の中で、Choxー1クラスタ-のデフォルムドタイプのホメオドメインを持つChoxー1.4遺伝子の標的遺伝子の探索を行っている。人工的なモデル標的配列を用いた実験では、Choxー1.4タンパク質はこの配列には結合するが、転写の活性化を引き起こさない事がわかっている。目的は、人為的にこのタンパク質を転写活性化因子に転換し、細胞に導入した時新たに誘導される転写産物の分離同定により標的遺伝子の同定を行うものである。Choxー1.4タンパク質のDNA結合活性を担うホメオドメインの上流部分をcーJun,cーmycの転写活性化ドメインに置換、あるいはホメオドメインの下流にVP16の転写活性化ドメインの導入し遺伝子の改変を行った。ニワトリ肝臓由来の株細胞LMHにおいては、いづれもが強い転写の活性化因子として機能する事がわかった。改変を行ったホメオドメインタンパク質は、転写活性化因子として機能し得る事がわかった。しかし一次培養系のニワトリ胚繊維芽細胞では、導入遺伝子からのタンパク質は産生されるもののどれも転写の活性化は引き起こさなかった。胚繊維芽細胞では、他のホメオドメインの転写活性化ドメインをChoxー1.4タンパク質と融合させる事により転写促進因子へと転換できた。東大医科研の伊庭氏との共同研究で、胚繊維芽細胞にウィルスベクタ-を用いChoxー1.4そのものを導入した。この場合トランスフォ-ムは起こさないが、明らかにChoxー1.4を持たないウィルスを感染させた時にはみられないような形態の変化が誘起された。人工的な標的配列を用いた場合には観察されないような作用が、胚繊維芽細胞に引き起こされたものと考えられる。今後は、改変した遺伝子を胚繊維芽細胞に安定に組み込んだり、ウィルスを用いて遺伝子を導入し、対照群とのディファレンシャルスクリ-ニンにより標的遺伝子の分離を試みる。

We are looking forward to exploring Chox 1.4 's heritage. The artificial target is arranged in the middle of the selection process. Chox-1.4 is arranged in the middle of the selection process. Objective: To study the effects of gene expression on the expression of active factors, the induction of new genes, the isolation and identification of target genes. Chox-1.4 is a protein with DNA binding activity in the upstream part of the protein. It is also a protein with DNA binding activity in the downstream part of the protein. In addition, it is necessary to strengthen the function of activating factors in LMH cells. Change the color of the material, change the activation factor, and change the function. The primary culture system is composed of embryonic cells and cells, and the cells are transformed into cells. Embryonic germ cells are activated by a selection of factors that promote fusion. A joint research project of Dongda Medical Research Institute was carried out to introduce embryonic cells into the medium Chox 1.4. In this case, Chox 1.4 is the first to be infected. The artificial target is used in the case of observation, embryo and germ cell induction. In the future, we will try to isolate the target gene by introducing the target gene into the embryo cell and stabilizing it.

项目成果

Tsutomu Nohno,Sumihare Noji,Eiki Koyama,Kazuhiko Ohyama,Fumio Myokai,Atsushi Kuroiwa,Taichi Sato and Shigehiko Taniguchi: "Involvement of the Chox-4 chicken homeobox genes in detemination of anteroposterior axial polarity during limb development" Cell. 64

Tsutomu Nohno、Sumihare Noji、Eiki Koyama、Kazuhiko Ohyama、Fumio Myokai、Atsushi Kuroiwa、Taichi Sato 和 Shigehiko Taniguchi：“Chox-4 鸡同源盒基因参与肢体发育过程中前后轴极性的确定”细胞。

Yuji Yokouchi,Kojune Osugi,Hiroshi Sasaki and Atsushi kuroiwa: "Chicken homeobox gene Msx-1:Structure,expression in limb buds and effect of retinoic acid." Development. 113. 431-444 (1991)

Yuji Yokouchi、Kojune Osugi、Hiroshi Sasaki 和 Atsushi kuroiwa：“鸡同源盒基因 Msx-1：结构、肢芽中的表达以及视黄酸的作用。”

Hiroshi Sasaki,Masakazu Yamamoto and Atsushi Kuroiwa: "Cell type dependent transcription regulation by chick homeodomain proteins" Mechanism of Development. (1992)

Hiroshi Sasaki、Masakazu Yamamoto 和 Atsushi Kuroiwa：“鸡同源域蛋白的细胞类型依赖性转录调节”发育机制。

Benoit Robort,Gary Lyons,B.kay Slmandl,Atsushi Kuroiwa and Masgaret Buckingham: "The apical ectodermal ridge regulates Hox-7 and Hox-8 gene expression in developing chick limb buds" Oenes and Development. 5. 2363-2374 (1991)

Benoit Robort、Gary Lyons、B.kay Slmandl、Atsushi Kuroiwa 和​​ Masgaret Buckingham：“顶端外胚层脊在发育中的小鸡肢芽中调节 Hox-7 和 Hox-8 基因表达”Oenes and Development。