ホメオドメインタンパク質の標的遺伝子の分離と機能解析

同源结构域蛋白靶基因的分离和功能分析

• 批准号: 05273202
• 负责人: 黒岩 厚
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05273202/
• 关键词: ホメオボックス; ホメオドメインタンパク質; 標的遺伝子; プロテインキナーゼ

本研究の目的はHoxa-4遺伝子がコードするホメオドメインタンパク質の標的遺伝子の分離を行い、この遺伝子がコードするタンパク質の機能を明らかにし、この遺伝子発現制御に対するホメオドメインタンパク質の作用を解析をするところにある。クロマチン免疫沈降によって得られた標的遺伝子の短いDNA断片をプローブとして用い、ニワトリDNAコスミドライブラリーから結合断片の周囲約60kbをカバーするゲノムDNAクローンを得た。この領域でのHOXA-4結合断片の位置を決定し、この部域にある制御エレメントの作用下にあると予想される転写単位同定した。この領域をプローブとしニワトリ5日胚cDNAライブラリーよりcDNAクローンを得、ゲノムでの位置関係を調べたところ、エクソンは30kbに散在し、HOXA-4結合断片はこの転写単位より3'側に位置することが判った。cDNAクローンの塩基配列決定の結果この遺伝子には、特殊な状況でRasのシグナル伝達系に抑制的機能に機能すること考えられている酵母のYAK1プロテインキナーゼと部分的な類似性が高いタンパク質がコードされていた。この標的遺伝子にはプロテインキナーゼに共通してみられるいくつかの機能ドメインが保存され、さらにMAPキナーゼのようなセリン/スレオニンとチロシンの両者のリン酸化を行ういわゆるdual-specificity kinaseに共通してみられる配列と、YAK1にはないMAPKKによって制御的リン酸化を受けるアミノ酸配列を持っていた。これらのことからこの標的遺伝子はまだ報告されていないMAPキナーゼである可能性が高い。この研究とは別にHOXA-13の標的遺伝子をやはりクロマチン免疫沈降法によって分離を試みており、肢芽においてHOXA-13が結合しているDNA断片を濃縮した。この分画には本標的遺伝子の分離に用いたHOXA-4結合断片が濃縮されていることが判った。これは複数のHox遺伝子による共通の標的遺伝子の制御の可能性を示唆するものであり、今後の解析が期待されている。

The purpose of this study is to isolate the target gene of Hoxa-4 gene, to clarify the function of the target gene, and to analyze the role of the target gene in the control of Hoxa-4 gene production. The short DNA fragment of the target gene was obtained by immunoprecipitation. The short DNA fragment of the target gene was obtained by immunoprecipitation. The position of the HOXA-4 binding fragment is determined by the action of the HOXA-4 binding fragment. This domain is located at the 30kb position of the HOXA-4 binding fragment and the 3'position of the cDNA fragment. The results of cDNA sequencing showed that the similarity of gene expression in yeast YAK1 gene expression was high. The target gene is a dual-specificity kinase, which is common to MAPKK and YAK1, which is a dual-specificity kinase, which is common to MAPKK and YAK1, which is a dual-specificity kinase. The probability of a negative result is very high. This study focused on the isolation of HOXA-13 target DNA fragments by immunoprecipitation. The separation of the target gene using HOXA-4 binding fragments is concentrated. This paper discusses the possibility of controlling the common target gene of multiple Hox genes, and looks forward to future analysis.