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新規脱ハロゲン活性を担うBHC分解系遺伝子の検索と解析

负责新型脱卤活性的 BHC 降解系统基因的搜索和分析

基本信息

批准号：
03660062
负责人：
福田雅夫
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03660062/
关键词：
BHC 分解系遺伝子脱ハロゲン転写制御転写プロモ-タ-欠損変異株

项目摘要

本研究ではPseudomonas paucimoblils SS86株のBHC分解能の育種に必要な知見を得るために同株由来のUT26株を用いて、(1)初発分解過程をコ-ドするlinA遺伝子に由来する活性の強化のためにlinA遺伝子の発現制御に関わる領域の構造と発現制御様式とを明らかにすること、(2)linA遺伝子がコ-ドするステップ以外の分解過程に関わる反応と遺伝子を検索して明かにするためにBHC分解能の欠損変異株を取得して変異株の代謝産物や分解過程を解析することを目的とした。1.linA遺伝子周辺の構造の解明:linA上流の約1200bpの塩基配列を明らかにし、この中に大腸菌のソルビト-ルー6ーリン酸脱水素酵素に相同性のあるORFを見いだした。2.linA遺伝子の発現制御様式の解明:部位特異的なDNAプロ-ブを用いたノ-ザン解析とプライマ-伸長法により転写物の同定と定量ならびに転写開始点の推定を行った。UT26株では専ら約600bの転写物が認められ、転写開始点はlinA直上流(ー93付近)と推定された。この近傍にはシュ-ドモナスの構成性プロモ-タ-に類縁の配列が見いだされた。大腸菌では1.45kbの転写物が主として検出され、転写開始点はlinA遺伝子から約950bp上流付近と推定された。これらの結果からlinA遺伝子の発現がUT26株と大腸菌とで異なる制御を受けることが示唆された。3.BHC分解能の欠損変異株を取得と解析:BHC分解能の欠損変異株を検索し、欠損変異株の分解活性の解析をBHC代謝産物のガスクロマトグラフィ-分析で行った。継代培養あるいは高温培養から得た欠損株はいずれもlinAのみの欠失変異株であった。Tn5による変異株もlinAの欠損株であったが、BHCの初発分解の次の過程にも欠損が認められた。この結果からlinAが初発分解の次の過程にも関与していることが示唆された。新たな分解系遺伝子の検索はlinA遺伝子活性の共存下に行うことが有効であると考えられる。

In this study, the BHC decomposition of Pseudomonas paucimoblils SS86 plant can help breed species. It is necessary to know the origin of the same plant. (1) the initial decomposition process of the UT26 plant is caused by the origin of the strain. The activity is enhanced. The linA sub-system is used in the field of production system. (2) in addition to the process of linA decomposition, it is clear that the decomposition of BHC is effective in the analysis of the process of decomposition. The results of the 1.linA analysis show that the 1200bp gene on the linA is located in the upper stream of the linA, and that the bacteria in the linA are similar to the acid dehydrase. The explanation of the 2.linA system is as follows: the DNA of the special part is analyzed by the stretching method and the starting point of the writing is presumed to be the same as the quantitative one. The UT26 plant is about 600b long, and the starting point and starting point of the write are linA directly upstream (near 93) and presumed to be valid. This is the first time that you have been assigned to a sexual relationship. The main reason for writing a 1.45kb message is to determine the source and start point of the linA message. The 950bp upstream is presumed to be valid. The results showed that the control of the UT26 strain was abetted by linA infection. 3.BHC decomposition analysis: BHC decomposition can be used to analyze the decomposition activity of BHC plants. In the second generation, the high temperature cultivation resulted in the deficiency of the plant, the linA and the loss of the plant. The Tn5 strain, the linA strain, the linA strain, the BHC strain, the initial stage, the second stage. The results of the experiment show that the linA system initially decomposes the secondary process response and the response response. In the case of the coexistence of the new decomposition system, the linA, the activity, the activity.