大腸菌細胞の全プロテア-ゼの構造と機能

大肠杆菌细胞中所有蛋白酶的结构和功能

• 批准号: 03660109
• 负责人: 市原 茂幸
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03660109/
• 关键词: Escherichia coli; protease; membrane

細胞のプロテア-ゼは相互にその複雑な作用を補いあっている。一細胞におけるプロフア-ゼの相互的な役割を明らかにすることを目的とし、存在する全てのプロテア-ゼ遺伝子をクロ-ニングし、その多重欠失変異株を得ることを試みている。本研究は地道な積み重ねが必要であり、1年間で具体的な成果を挙げることはできない。計画に述べた具体的な作業がどの程度進行しているかを報告する。(1)既知プロテア-ゼ遺伝子のクロ-ニングと多重欠失変異株の作製ーーーさしあたり表層プロテア-ゼに主眼を置いている。これまでに表層に存在する9種の既知プロテア-ゼ遺伝子のうち8種のクロ-ンを得た。8種中5種(apeA,sppA,pepN,ptr and ProteaseV)の多重変異株は作製した。この5種同時欠失変異株は正常に生育することを確認した。(2)多重変異株作製法の検討ーーー目的遺伝子を薬剤耐性遺伝子と置き換え変異体を作製する方法は、薬剤耐性遺伝子の種類に限度があり、5種以上の多重変異株の作製はできない。ackA遺伝子とフルオロ酢酸を利用し、薬剤耐性遺伝子を残さず、かつポジティブに次失変異株を選択する方法を開発した。この方法によりクロ-ン化できた8種の同時欠失変異株の作製を現在試みている。(3)未知プロテア-ゼ遺伝子の検索ーーー500株のSDS感受性形質転換株からなるバンク株の活性を種々の基質を用いて測定しているが現在のところ新しいプロテア-ゼのクロ-ンは見いだされていない。本研究過程において、上記(3)のバンク中SDS感受性の顕緒なクロ-ンについては、機能を明らかにする目的で検討を行った。その結果、94.3minのkil(溶菌リポタンパク質)および、35.0minのacep(acetete permease)、5.9minの新しい外膜タンパク質、その他2種の遺伝子を新しく同定し、それらのDNA一次構造等を明かにした。

The cells are in the middle of a complex interaction. A cell is a multiple-cell, multiple-cell. This study is based on the accumulation of important information and the concrete results within one year. The plan describes the extent to which specific operations are being carried out. (1)It is known that the surface layer of the plant is in the middle of the plant. There are 9 kinds of known genes in the surface layer of this plant, and 8 kinds of genes in the surface layer of this plant. 5 of 8 species (apeA,sppA,pepN,ptr and ProteaseV) showed multiple heterosis. The five species were found to be deficient in fertility. (2)The method for producing multiple mutants includes the following steps: 1. The method for producing multiple mutants includes the following steps: 1. The method for producing multiple mutants includes the following steps: Development of a method for the selection of secondary mutants by the use of ack-A mutants and resistant mutants 8 species of these plants were identified and the production of these plants was tested. (3)500 strains of SDS susceptible strain were tested for their activity in the medium. In this study, the purpose of SDS sensitivity and function was discussed. The results were as follows: 94.3 min of kil, 35.0 min of acep, 5.9 min of new outer membrane, 2 kinds of DNA, 3 kinds of DNA, etc.

项目成果

市原 茂幸,水野 猛: "新生化学実験講座 第1巻 VI 合成および発現,21.分泌タンパク質のプロセッシング" 東京化学同人,

Shigeyuki Ichihara、Takeshi Mizuno：《新生物化学实验教程第 1 卷 VI 合成与表达，21. 分泌蛋白的处理》东京化学同人，

S.Ichihara and I.Kawamura: "Molecular Cloning,Sequencing and Character izations of Two Small Membrane Lipoproteins in Escherichia coli"

S.Ichihara 和 I.Kawamura：“大肠杆菌中两种小膜脂蛋白的分子克隆、测序和表征”

S.Ichihara,K.Hosono and T.Mizuno: "Identification and Characterizations of the Acetate Permease in Escherichia coli"

S.Ichihara、K.Hosono 和 T.Mizuno：“大肠杆菌中乙酸渗透酶的鉴定和表征”

S.Ichihara,K.Sakai and T.Mizuno: "Allelic EXchange Using the ackA Gene and a TemperatureーSensitive pSC101 Replicon in Escherichia coli"

S.Ichihara、K.Sakai 和 T.Mizuno：“在大肠杆菌中使用 ackA 基因和温度敏感的 pSC101 复制子进行等位基因交换”

S.Ichihra,Y.Matsubara and S.Mizushima: "Protease I Localizedin the Periplasm and Protease V in the Membrane are Encoded by the Same Gene,apeA,in Escherichia coli"

S.Ichihra、Y.Matsubara 和 S.Mizushima：“在大肠杆菌中，位于周质中的蛋白酶 I 和膜中的蛋白酶 V 由同一基因 apeA 编码”