小児癌患者化学療法後の,HGPRT座突然変異の頻度と,その分子レベルの解析

儿童癌症患者化疗后HGPRT位点突变频率及其分子水平分析

• 批准号: 03670490
• 负责人: 久保田 優
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1992
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670490/
• 关键词: 癌化学療法; HGPRT; 突然変異; サザンブロット法

二次癌発生のリスクが極めて高いとされる攻撃的癌化学療法後の,小児悪性腫瘍患児について,HGPRT座の体細胞突然変異を検討した。主として本院に於て,癌化学療法を終了,完全寛解を維持している1歳〜23歳の悪性腫瘍患児82名を対象とした。末梢血リンパ球を採取後,PHA及rILー2を添加培養し,6ーチオグアニン(6ーTG)添加・無添加の状態で,細胞をクロ-ニングした。2週間後,両者のコロニ-数をカウントして,HGPRT座突然変異頻度(Mf)を算出した。正常成人では,Mfは10^<-6>〜10^<-5>の範囲内で,平均は3×10^<-6>であった。ALLや悪性リンパ腫の患者の中には,Mfが10^<-5>を越え,10^<-4>に達するものが見られた。AML患者のMfは,すべて正常範囲内であった。これらMfが高値の例の多くは,治療終了後数年を経過しており,変異がstem cellレベルで生じていると考えられた。次に患児より得られた,6-TG resistant cloneのHGPRT geneをPstーI digestionによるサザンブロット法で検討した。RFLPに変異の見られないもの(Point mutation)が約3/4であったが,一部exonに欠損,変異のあるものが20%近く存在した。一方,健常人に見られる欠損頻度は,10%以下で,化学療法が体細胞突然変異を誘発している可能性が示唆された。同時に行った変異クロ-ンのT cell receptorの,rearrangementの解析から,得られたクロ-ンの殆どが異なるclonalityを持つことが判明した。今後更に,同一患児のMfの経時的測定(化学療法中も含めて),HGPRT以外のlocus例えば,赤血球Glycophorin Aや,HLA座の変異頻度をあわせて比較検討し,癌化学療法後の体細胞突然変異の機構を解析したい。

Secondary cancer is caused by high-risk cancer after chemotherapy, small tumor is caused by small tumor, and HGPRT is caused by sudden change of somatic cells. I am a doctor at our hospital, and I have completed 82 patients with cancer chemotherapy, including 1 year old to 23 years old, and sustained cancer chemotherapy. After the peripheral blood pellets were collected, PHA and rIL were added to culture, 6-Tag (6-TG) was added or not added, and the cells were cultured. Two weeks later, the HGPRT block suddenly changed its frequency (Mf) and calculated it. For normal adults, Mf is within the range of 10^<-6>~10^<-5>, and the average is 3×10^<-6>. ALL is a swollen patient with の中には. AML patients have no symptoms and no symptoms within the normal range.これらMfが高値の码の多くは, a few years after the end of treatment, を経passing しており, 変一がstem cell レベルで生じていると考えられた. The time is られた, the 6-TG resistant cloneのHGPRT geneをPstーI digestionによるサザンブロット法で検した. RFLP's original point mutation is about 3/4, one exon is missing, and the original point mutation is about 20%. On the one hand, the frequency of damage in healthy people is less than 10%, and the possibility of sudden changes in somatic cells induced by chemotherapy is not obvious. At the same time, に行った変different クロ-ンのT cell receptorの,rearrangementのanalytic から,get られたクロ-ンのどがdifferent なるclonalityをhold つことが clarificationした. To be updated in the future, the measurement of Mf in the same patient (during chemotherapy), cases of locus other than HGPRT, and erythrocyte Glycophorin A: The frequency of HLA changes is relatively high, and the mechanism of sudden changes in somatic cells after cancer chemotherapy is analyzed.

项目成果

橋本 尚子: "小児癌化学療法後のHGPRT geneにおける体細胞突然変異の検討" プリン・ピリミジン代謝. 15. 137-139 (1991)

Naoko Hashimoto：“儿童癌症化疗后 HGPRT 基因体细胞突变的调查”嘌呤和嘧啶代谢 15. 137-139 (1991)。

Tsunehiro Shimizu: "Pretreatment of a human T lymphoblastoid cell line with 1ーasparaginase reduces etoposideーinduced DNA strand breakage and cytotoxiaty" Int.J.Cancer. 49. (1992)

Tsunehiro Shimizu：“用 1-天冬酰胺酶预处理人 T 淋巴母细胞系可减少依托泊苷诱导的 DNA 链断裂和细胞毒性”Int.J.Cancer 49。（1992）

MASARU Kubota: "Generation of DNA damage by antiーneoplastic agents" AntiーCancer Drugs. 2. 531-541 (1991)

MASARU Kubota：“抗肿瘤药物产生 DNA 损伤”抗癌药物。2. 531-541 (1991)

HiSAKO Hashimoto: "Molecular analysis of HGPRT mutation following cancer chemotherapy in childhood." Cancer Research.

HiSAKO Hashimoto：“儿童癌症化疗后 HGPRT 突变的分子分析。”

Hirohiko Sano: "Increased methotrexateーinduced DNA strand breaks and cytotoxicity following mutational loss of thymidine kinase" Int.J.Cancer. 48. 92-95 (1991)

Hirohiko Sano：“胸苷激酶突变丢失后甲氨蝶呤诱导的 DNA 链断裂和细胞毒性增加”Int.J.Cancer 48. 92-95 (1991)