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小児癌患者化学療法後の,HGPRT座突然変異の頻度とその分子レベルの解析(II)

儿童癌症患者化疗后HGPRT位点突变频率及其分子水平分析（二）

基本信息

批准号：
04670593
负责人：
久保田優
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670593/
关键词：
癌化学療法 Tリンパ球 HGPRT 突然変異サザンブロット法

项目摘要

昨年に続いて、強力な癌化学療法を施行した後の小児癌患者の末梢血リンパ球HGPRT座の突然変異につき検討を加えた。方法は、末梢血リンパ球を採取後、PHA及びrIL-2を添加培養し、6-チオグアニン(6-TG)添加、無添加の条件下で細胞をクローニングした。2週間後、両者のコロニー数をカウントし、HGPRT座の突然変異頻度(Mf)を算出した。本年度はまず、Age-matchedの健康小児(両親に検査の趣旨を説明し同意を得た)につきMfを求め、コントロール値を作成した。Age-matchedの健康小児のMfは、1-3_X10^<-6>で、正常成人より低値であった。更に、Mfが高値を示した(10^<-5>以上)ALLや悪性リンパ腫の患者につき、1年以上の期間に渡ってMfを経時的に測定した所、その殆どが有意の変化を示さず、HGPRT座の変異がStem cellレベルで起きている可能性を示唆した。得られた6-TG耐性クローンのHGPRT geneを、Pst-1 digestionによるSouthern blottingで検討した。患者から得たクローンでは、RFLPに変異の見られないものが約3/4で、一部Exonに欠損、変異のあるものが20%存在した。しかし、正常小児からのクローンでは、例数が少ないものの欠損例は見られなかった。赤血球Glycophorin Aや、T cell receptorの変異頻度測定に関するAssay法を本年度に確立した。今後、HGPRT座の変異頻度の高い症例につき、これらの遺伝子座の変異を併せて検討して行きたい。又、我々はHGPRT座の変異頻度の高い患者リンパ球より、EB-virusを用いて細胞株を樹立するのに成功した。これらを用いて他のLocus変異や、DNA修復機構の変化等を検討したい。

The sudden changes in peripheral blood and HGPRT sites in small children with cancer following intensive chemotherapy last year have been discussed. Methods After peripheral blood was collected, PHA and rIL-2 were added to culture, 6-TG was added, and cells were cultured without addition. After 2 weeks, calculate the frequency of sudden change (Mf) of HGPRT. This year, we have created a new Age-matched health profile (the purpose of the survey was explained and agreed). Age-matched healthy children Mf, 1-3_X10 <-6>^, normal adults In addition, Mf is higher than (10^or <-5>more), and the possibility of HGPRT site variation and Stem cell variation is indicated. 6-TG resistance to HGPRT gene, Pst-1 digestion and Southern blotting were obtained. About 3/4 of the patients had RFLP, and 20% of the patients had RFLP. The number of cases is small and the number of cases is small. This year, the Assay was established to determine the frequency of erythrocytes Glycophorin A and T cell receptors. In the future, the frequency of HGPRT constellation variation is high, and the frequency of HGPRT constellation variation is high. In addition, we have successfully established cell lines with high frequency of HGPRT locus differentiation. This article discusses the changes of DNA repair mechanism and the changes of its Locus.