染色体マイクロディセクション法を用いたグリセロ-ルキナ-ゼ遺伝子の単離

利用染色体显微切割法分离甘油卢激酶基因

• 批准号: 03670499
• 负责人: 松本 正
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670499/
• 关键词: マイクロディセクション; マイクロクロ-ニング; グリセロ-ルキナ-ゼ

1)プライマ-の合成;制限酵素EcoRI認識配列を有するオリゴプライマ-を合成した。2)染色体マイクロディセクション;正常個体リンパ球を染色体分析と同じ方法で培養し、30本のX染色体からXp21部位をマイクロディセクション法にて切り出した。3)マイクロクロ-ニング;切り出した染色体断片を集め、proteinaseK処理にてDNA抽出を行った。1)のプライマ-を混合してPGR法にてDNA増幅を施行。この一部を電気泳動すると50ー2000bp長のDNAのスメアであり、十分な長さのDNAが増幅されていた。PCR産物の一部をEcoRI消化後ベクタ-pUC18に組み込み、大腸菌DH5αに感染させ、プレ-ティングしてXーgalシステムでスクリ-ニングを行った。約500個のX染色体DNA断片を有すると思われるクロ-ンが得られた。Miniーprep法にて各クロ-ンDNAを抽出保存した。このうち10個のクロ-ンのインサ-トDNAの平均長は約300bpであった。4)クロ-ンの選別;インサ-トDNAがX染色体由来であることを確認するためサザンブロット法を施行した。5XY個体および正常男性のHindIII消化DNAのブロットフィルタ-を10枚作成し、各インサ-トをプロ-ブとして順次サザン法を行い、X染色体由来かつsingle copyであるクロ-ンを選択した。現在8個のクロ-ンを得ている。5)CGKD患者とのサザン法;集積した8名のCGKD患者の内、DMD遺伝子とプロ-ブC7との間に切断点を有する3名よりブロットフィルタ-を作成し、4)で得られたクロ-ンとサザン法を施行し、ハイブリダイズしないクロ-ンを選択する。現在1個のクロ-ンを得ている。

The main results are as follows: 1) the restriction enzyme EcoRI has been synthesized, and the enzyme has been synthesized. 2) the chromosome analysis of normal individuals is the same as that of X chromosome, Xp21 site, chromosome analysis, chromosome analysis and chromosome analysis. 3) cut out the collection of chromosome fragments, proteinaseK and DNA extraction lines. 1) the PGR method and the DNA method shall be implemented. If you want to use an electric swimming machine, it will cost 50 2000bp, and 10 percent of the time will be too long for the DNA to enjoy it. PCR was used to treat EcoRI after digestion. The tissue samples were pUC18, DH5 α, and the bacteria were infected with bacteria. The bacteria were infected with gal. There were about 500 DNA fragments of X chromosome. The Mini prep method is used to extract and save the data. The average length of the 10-year-old DNA is about the length of the 300bp. 4) the origin of the DNA X chromosome, the origin of the X chromosome. 5XY, normal male, HindIII digestion, DNA digestion, and so on. 10 of them were made, each of which was made of single copy, and the origin of the X chromosome was selected. At present, there are 8 successful candidates. 5) CGKD patients were divided into two groups: in 8 patients with CGKD, there were 3 cutoff points in 8 patients with CGKD, and there were 3 patients in the cut-off point. 4) there were three patients in the cutting point. At present, there is one customer in the market-the price is satisfactory.

项目成果

TADASHI MATSUMOTO: "Microcloning at Xp21 region by microdisection method." Jph.J.Hum.Genet.

TADASHI MATSUMOTO：“通过显微切割方法在 Xp21 区域进行微克隆。”