チロシンキナーゼとイノシトールリン脂質情報伝達系のクロストークの解明

阐明酪氨酸激酶和肌醇磷脂信号系统之间的串扰

• 批准号: 04152139
• 负责人: 竹縄 忠臣
• 金额: $ 6.4万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04152139/
• 关键词: ホスホリパーゼCγ; SH_2; チロシンキナーゼ; Ash; Ras

チロシンキナーゼとイノシトールリン脂質情報伝達系のクロストークを解明するため、チロシンリン酸化部位を認識して結合するSH_2含有蛋白の解析と情報伝達機序を調べた。1.ホスホリパーゼCγ1のSH_2領域のホスホリパーゼC活性阻害PLCγ_1とPLCγ_2のSH_2/SH_3領域をを大腸菌に発現し、タンパクを精製した、この蛋白を使用してPLC活性への影響を調べたところ、すべてのPLCアイソザイムの活性を強く阻害した。この阻害はプロテアーゼ処理で消失した。この阻害活性はPLCγのSH_2にのみ特異的で、PIキナーゼやSrcのSH_2では認められなかった。更にPLCγのSH_2に特異的なペプチド部分を合成し効果を調べたところ、YRKMRLRYという合成ペプチドをPLC活性を強く阻害した。この事実はPLCγ型ホスホリパーゼCは自己の活性を自身でコントロールしていると考えられた。2.新しいSH_2蛋白AshのcDNAクローニングSH_2を持つ蛋白によく保存されている領域より推定した合成オリゴヌクレオチドプローブを使ってヒト繊維芽細胞のcDNAライブラリーより新しいSH_2蛋白Ashをクローニングした。Ashは28Kの蛋白でSH_3-SH_2-SH_3の配列を持つAshは活性化したEGF受容体に結合し,その結合にはSH_2領域が必須であった。Ashのアンチセンスを発現させると細胞の増殖が停止することからAshは受容体チロシンキナーゼの下流であり、Rasの上流に位置していると考えられた。

SH_2 contains protein analysis and information transfer mechanism. 1. The SH_2 domain of Cγ1 prevents the activity of C from being detected in E. coli in the SH_2/SH_3 domain of PLCγ_1 and PLCγ_2. By refining the protein and using it, the effect on PLC activity can be modulated, and the activity of this PLC protein is strongly inhibited. This is the first time I've ever seen a woman. The inhibition activity is PLCγ and SH_2, and PI γ and Src γ and SH_2 are different. In addition, the synthesis effect of the SH_2-specific peptide part of PLCγ is adjusted, and the YRKMRLRY ~ IU synthetic peptide strongly inhibits PLC activity. This is the first time that I've seen you. 2. SH_2 protein cDNA library SH_2 protein cDNA library SH_2 protein library SH_2 protein library SH_2 Ash 28K protein SH_3-SH_2-SH_3 alignment remains active in EGF receptor binding, but binding in SH_2 domain is essential. The growth of Ash and Ras was stopped.

项目成果

K.Fukami et al.: "Requierment of phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate for -actinin function" Nature. 359. 150-152 (1992)

K.Fukami 等人：“β-肌动蛋白功能所需的磷脂酰肌醇 4,5-二磷酸”自然。

N.Kawai et al.: "Neuroreceptors,Ion-channels and the Brain" Elsevier Science Publishers, (1992)

N.Kawai 等人：“神经感受器、离子通道和大脑”Elsevier Science Publishers，（1992）

K.Fukami et al.: "Phosphatidic acid that accumulates in PDGF-stimulated Balb/c 3T3 cells in a potential mitogenic signal" J.Biol.Chem.267. 10988-10993 (1992)

K.Fukami 等人：“磷脂酸在 PDGF 刺激的 Balb/c 3T3 细胞中积累，产生潜在的有丝分裂信号”J.Biol.Chem.267。

Y.Homma et al.: "Activation of phospholipase C as well as tyrosine kinase in rat 3Yl fibroblast by expression of srcregion of phospholipase C-γ2" J.Biol.Chem.267. 3778-3782 (1992)

Y.Homma等人：“通过表达磷脂酶C-γ2的src区域来激活大鼠3Y1成纤维细胞中的磷脂酶C以及酪氨酸激酶”J.Biol.Chem.267(1992)。

Y.Homma et al.: "Purification of recombinant SH2/SH3 proteins of phospholipase Cγ1 and γ2 and their inhibitory effect on PIP2 hydrolysis induced by both type of phospholipase Cγ" Biochem.Biophys.Res.Commun.182. 1402-1407 (1992)

Y. Homma 等人：“磷脂酶 Cγ1 和 γ2 的重组 SH2/SH3 蛋白的纯化及其对两种类型磷脂酶 Cγ 诱导的 PIP2 水解的抑制作用”Biochem.Biophys.Res.Commun.1402-1407（1992 年） ）