Solution structure of the Ras-binding domain of AF6 and its interaction with the Ras-protein

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Das beantragte Projekt beschäftigt sich mit der Strukturaufklärung der Ras-bindenden Domäne von AF6, einem Effektor von Ras, der wahrscheinlich eine wichtige Rolle bei der Steuerung der Zell-Zell-Interaktion spielt. Im Gegensatz zu anderen Ras-Effektoren scheint AF6 keine eigene enzymatische Aktivität zu haben. Die Minimaldomäne für effektive Bindung an Ras ist mit 142 Aminosäuren deutlich größer als sie anderen Rasbindungsdomänen mit bekannter Struktur und läßt daher neue Strukturmotive erwarten. Die dreidimensionale Struktur der Ras-bindenden Domäne von AF6 soll mit multidimensionalen heteronuclearen NMRMethoden am isotopenangereicherten Protein aufgeklärt werden. Anschließend soll die Interaktion mit Ras mit NMR-Methoden charakterisiert werden. Für die darauffolgende Strukturbestimmung im Komplex mit Ras soll das Protein mit der Intein-Methode partiell mit den Isotopen 2H, 15N und 13C angereichert werden, um die Zuordnungsproblematik im hochmolekularen Komplex zu erleichtern und die Strukturbestimmung zu beschleunigen.