Lösungsstruktur der Ras-Bindungsdomäne von Nore1 und strukturelle Charakterisierung der Nore1-Ras-Mst1-Interaktion

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Das beantragte Projekt beschäftigt sich mit der Strukturaufklärung der Ras-bindenden Domäne von Nore1 (Novel Ras effector), einem Effektor von Ras, der wahrscheinlich eine wichtige Rolle bei der Ras-abhängigen Steuerung der Apoptose spielt. Im Gegensatz zu anderen Ras-Effektoren scheint Nore1 keine eigene enzymatische Aktivität zu haben. Die Minimaldomäne für effektive Bindung an Ras ist mit 161 Aminosäuren deutlich größer als die anderer Rasbindungsdomänen mit bekannter Struktur und läßt daher neue Strukturmotive erwarten. Die dreidimensionale Struktur der Ras-bindenden Domäne von Nore1 soll mit multidimensionalen heteronuclearen NMR-Methoden am isotopenangereicherten Protein aufgeklärt werden. Anschließend soll die Interaktion mit Ras mit NMR-Methoden charakterisiert werden. Für die darauffolgende Strukturbestimmung im Komplex mit Ras soll das Protein mit der Intein-Methode partiell mit den Isotopen 2H,15N und 13C angereichert werden, um die Zuordnungsproblematik im hochmolekularen Komplex zu erleichtern und die Strukturbestimmung zu beschleunigen.