ヒト神経芽腫の分化誘導療法の基礎的研究

ヒト神経芽腫(Neuroblastoma 以下NB)は、神経冠由来の悪性腫瘍で、小児固形悪性腫瘍の中で最も頻度が高い。また進行NB患児の予後は現在なお不良である。我々は、現在まで種々の分化誘導剤を用いて、NBの多分化能を検討、NBの神経細胞、Schwann細胞あるいは平滑筋細胞への分化を明らかにしてきた。本研究は、化学療法と外科手術後の残存腫瘍の根絶を分化誘導療法で行ない、進行性 NBの予後改善をはかることを最終目的とする。このため【.encircled1.】retinoidによるNBのin vitroでの細胞分化誘導の機序を明らかにし、また【.encircled2.】ヌード・マウスを用いてin vivoでの分化誘導療法の可能性を検討した。1.分化誘導剤の選択:NBの神経細胞への分化誘導を、種々の分化誘導剤を用いて検討した。そのうち合成 retinoid(E5166)は、in vitroでのNBの神経細胞への分化誘導能が最も強く、また副作用もretinoic acidの1/10と少なく、臨床応用が最も期待される分化誘導剤であった。このため以下の研究ではE5166を用いた。2.ヌード・マウスでの分化誘導療法:NB細胞株KP-N-RTを20×10^6個宛ヌード・マウスに移植すると、約90日で腫瘍が触知可能となる。そこでNB移植翌日(Day 1)、腫瘍触知(Day 90)あるいは腫瘍5mm大(Day 120)の時期より、E5166を経口投与した。そしてE5166の腫瘍の増殖に及ぼす影響を経日的に観察した。その結果NB移植翌日(Day 1)よりE5166を投与した群で有意に腫瘍増殖抑制がみられた。また腫瘍増殖抑制がみられたE5166投与ヌード・マウス群のNB移植腫瘍を用いて、形態学的変化を検討した。その結果NB細胞の神経細胞への分化と間質の増殖(Schwann細胞への分化と考えられる)が見られた。3.retinoidによる神経細胞への分化の機序:retinoidによるNBの分化誘導の機序はよく分かっていない。そこでretinoic acid受容体alpha,betaとgammaのcDNAを用いて、NBの神経細胞への分化能とretinoic acid受容体との関係を検討した。その結果E5166処理により、retinoic acid受容体(alphaとbeta)のmRNA発現が増加した。4.その他のretinoidによる分化誘導:E5166以外の合成retinoid(Am80,Ch55,Am580,Re80)(東大首藤教授より供与)についても、NBの分化誘導能を検討した。その結果Am80,Ch55とRe80にNB細胞の神経細胞への分化能があることが判明した。以上retinoidによるNB細胞の神経細胞への分化が、in vitroとin vivoで証明され、ヒトNB患児での分化誘導療法の可能性が示された。

ヒト神経芽腫(Neuroblastoma 以下NB)は、神経冠由来の悪性腫瘍で、小児固形悪性腫瘍の中で最も頻度が高い。また進行NB患児の予後は現在なお不良である。我々は、現在まで種々の分化誘導剤を用いて、NBの多分化能を検討、NBの神経細胞、Schwann細胞あるいは平滑筋細胞への分化を明らかにしてきた。本研究は、化学療法と外科手術後の残存腫瘍の根絶を分化誘導療法で行ない、進行性 NBの予後改善をはかることを最終目的とする。このため【.encircled1.】retinoidによるNBのin vitroでの細胞分化誘導の機序を明らかにし、また【.encircled2.】ヌード・マウスを用いてin vivoでの分化誘導療法の可能性を検討した。1.分化誘導剤の選択:NBの神経細胞への分化誘導を、種々の分化誘導剤を用いて検討した。そのうち合成 retinoid(E5166)は、in vitroでのNBの神経細胞への分化誘導能が最も強く、また副作用もretinoic acidの1/10と少なく、臨床応用が最も期待される分化誘導剤であった。このため以下の研究ではE5166を用いた。2.ヌード・マウスでの分化誘導療法:NB細胞株KP-N-RTを20×10^6個宛ヌード・マウスに移植すると、約90日で腫瘍が触知可能となる。そこでNB移植翌日(Day 1)、腫瘍触知(Day 90)あるいは腫瘍5mm大(Day 120)の時期より、E5166を経口投与した。そしてE5166の腫瘍の増殖に及ぼす影響を経日的に観察した。その結果NB移植翌日(Day 1)よりE5166を投与した群で有意に腫瘍増殖抑制がみられた。また腫瘍増殖抑制がみられたE5166投与ヌード・マウス群のNB移植腫瘍を用いて、形態学的変化を検討した。その結果NB細胞の神経細胞への分化と間質の増殖(Schwann細胞への分化と考えられる)が見られた。3.retinoidによる神経細胞への分化の機序:retinoidによるNBの分化誘導の機序はよく分かっていない。そこでretinoic acid受容体alpha,betaとgammaのcDNAを用いて、NBの神経細胞への分化能とretinoic acid受容体との関係を検討した。その結果E5166処理により、retinoic acid受容体(alphaとbeta)のmRNA発現が増加した。4.その他のretinoidによる分化誘導:E5166以外の合成retinoid(Am80,Ch55,Am580,Re80)(東大首藤教授より供与)についても、NBの分化誘導能を検討した。その結果Am80,Ch55とRe80にNB細胞の神経細胞への分化能があることが判明した。以上retinoidによるNB細胞の神経細胞への分化が、in vitroとin vivoで証明され、ヒトNB患児での分化誘導療法の可能性が示された。