受容体高親和性新規組換えTNFを用いた抗腫瘍効果増強ならびに副作用軽減の試み

尝试利用具有高受体亲和力的新型重组TNF来增强抗肿瘤效果并减少副作用

• 批准号: 05152104
• 负责人: 渡辺 直樹
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152104/
• 关键词: Tumor Necrosis Factor; Mutein TNF; Cytotoxic Effect; Anti Tumor Effect; Side Effect; Receptor

TNFの抗腫瘍活性の増強と副作用の軽減を目的として、立体構造上、受容体結合部位と考えられているN末端側を中心に、各種TNF変異体を作製し、その腫瘍細胞傷害活性、受容体結合能およびin vivoにおける抗腫瘍効果、致死毒性、血圧低下に与える影響を検討した。N末端アミノ酸を7個欠失し、さら8、9、10番目のPro,Ser,AspをそれぞれArg,Lys,Argに変化させたTNF変異体471は、intact TNFに比べ、約7倍のL-M細胞傷害性を示した。また、L-929細胞膜表面TNF受容体に対する結合能を、125I標識intact TNFとの競合試験で検討したところ、TNF変異体471はintact TNFの約1/2量で125I標識intact TNFの結合を50%阻害した。すなわち、TNF変異体471はintact TNFに比べ受容体結合能が高いことが明かとなった。さらに、Meth A細胞移植Balb/cマウスを用い、TNF変異体471のin vivoにおける抗腫瘍活性を検討したところ、intact TNFに比べ著明な腫瘍増殖抑制効果を示した。生存率の面からも、intant TNF投与群の50%生存が投与後37日であったのに対し、TNF変異体471投与群では61日と延長し、5匹中2匹に腫瘍の完全消失が認められた。一方、TNF変異体471の副作用を、ガラクトサミン負荷C3H/HeJマウスに対する致死毒性(LD50)の面から調べたところ、intact TNFの約1/18と軽減していた。また、TNFの全身投与に際しMTDの規定因子となっている血圧降下作用も、ラットに投与後、尾動脈の収縮期血圧を測定し検討したところ、TNF変異体471ではintact TNFに比べ約1/4に軽減していた。すなわち、TNF変異体471を用いることにより、抗腫瘍活性の増強と、副作用の軽減が可能であることが示唆された。

The increase of TNF anti-tumor activity, the decrease of side effects, the stereostructure, the receptor binding site, the N-terminal center, the inhibition of various TNF isoforms, the tumor cell injury activity, the receptor binding activity in vivo, the anti-tumor effect, the lethal toxicity, the blood pressure depression and the influence of TNF were discussed. N-terminal amino acids were found to be 7-fold more toxic than Pro,Ser,Asp,Arg,Lys, Arg, TNF-471, and TNF-10 than L-M. L-929 cell membrane TNF receptor binding energy, 125I label intact TNF and competing assay, TNF heterogeneic 471 intact TNF binding about 1/2 amount, 125I label intact TNF binding 50% inhibition. The binding energy of TNF is higher than that of receptor. In addition, Meth A cell transplantation Balb/c cells were used to detect the anti-tumor activity of TNF-α 471 in vivo. Survival rate: 50% survival rate: 37 days survival rate: 471 days survival rate: 61 days survival rate: 2 days survival rate: 50% survival rate: 37 days survival rate: 471 days survival rate: 471 days survival rate: 50% survival rate: 471 days survival rate: 471 days survival rate: 50% survival rate: 471 days survival rate: 471 days survival rate: 50% survival rate: 471 days survival rate: 50% survival rate: 471 days survival rate: 477 days survival rate: 477 days survival rate: 50% survival rate: 471 days survival rate: 471 days survival rate: 477 days survival rate: 471 days survival rate: The side effects of TNF-471 were reduced by about 1/18 of the lethal toxicity (LD50) of TNF-471. The MTD regulation factor for TNF systemic administration reduces blood pressure by about 1/4 of the normal value of TNF after administration and during contraction. The effect of TNF-471 on the growth of tumors and the possible reduction of side effects

项目成果

Watanabe N.,et al.: "Cancer Treatment by Hyperthermia,Radiation and Drugs." Taylor and Francis, 10 (1993)

Watanabe N. 等人：“通过热疗、放射线和药物进行癌症治疗”。

Masegi T.,et al.: "Hyperactive TNF-alpha derivatives with combinational mutations in the amino and carboxyl terminal regions." Biotechnolgy Letters. 15. 1107-1110 (1993)

Masegi T. 等人：“在氨基和羧基末端区域具有组合突变的高活性 TNF-α 衍生物。”

Maeda M.,et al.: "Enhanced antitumor effect of recombinant human tumor necrosis factor in combination with recombinant human granulocyte colony-stimulating factor in BALB/c mice." Jpn.J.Cancer Res.84. 921-927 (1993)

Maeda M.,et al.：“重组人肿瘤坏死因子与重组人粒细胞集落刺激因子联合使用，可增强 BALB/c 小鼠的抗肿瘤作用。”