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C型肝炎ウイルスプロテアーゼの発見とその性質の解明

丙型肝炎病毒蛋白酶的发现及其特性的阐明

基本信息

批准号：
05760061
负责人：
門倉広
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760061/
关键词：
C型肝炎ウイルスプロテアーゼ

项目摘要

C型肝炎の原因となるC型肝炎ウイルスは、10kbの+鎖RNAウイルスで1つの読み枠から1つの前駆体タンパク質が翻訳されたあと切断を受けて粒子形成に必要な各タンパク質がつくられる。この過程にウイルス自身のプロテアーゼ活性が必須であり、その特異的な阻害剤は治療にきわめて効果的であると期待される。本研究では、C型肝炎ウイルスプロテアーゼの酵素としての性質特にその必須領域、活性残基および基質特異性を明らかにする目的で以下の実験をおこなった。C型肝炎ウイルスと近縁のフラビウイルスではNS3領域のN末端1/3の領域にNS2、NS3間を切断するプロテアーゼ活性が存在することが確認されている。C型肝炎ウイルスの場合にもNS3領域のN末端1/3にキモトリプシン型プロテアーゼと相同性の高い部位が存在しNS2、NS3間には切断点と予想される2個の塩基性アミノ酸と側鎖の小さなアミノ酸残基からなる配列が存在している。そこでウイルスプロテアーゼ活性を検出する目的でNS2、NS3領域をウサギ網状赤血球ライセ-トをもちいた無細胞翻訳系で発現を試みた。また同領域をグルタチオン S-トランスフェラーゼとの融合タンパク質として大腸菌での発現も試みた。その結果いずれの系においても分子量から目的の遺伝子産物と判断できるタンパク質の発現には成功した。しかしフラビウイルスの場合にみられるようなプロテアーゼ活性は今回用いた領域では検出できなかった。宿主シグナルペプチダーゼの関与も考えミクロゾーム画分を加え反応を行ったが切断は見られなかった。現在、用いている領域ではプロテアーゼ活性に不十分であると考え、より広い領域について発現をおこなっている。

Hepatitis C causes hepatitis C virus infection, 10kb DNA + lock RNA infection, 10kb DNA + lock RNA infection, 1 kb DNA precursor, 1 kb DNA precursor, 1, DNA precursor, 1 kb DNA precursor, 1, DNA precursor, 1, DNA precursor The process itself must be active, and the specific resistance to treatment must be active. The purpose of this study is to clarify the essential domain, active residue and matrix specificity of hepatitis C virus. Hepatitis C virus infection is confirmed to be present in the N-terminal 1/3 of the NS3 domain, and in the NS2 and NS3 domains. In hepatitis C, the N-terminal 1/3 of the NS3 domain contains two basic amino acid residues, one acid residue and the other acid residue. The aim of this study is to detect the activity of NS2 and NS3 cells in the cell-free system. In the same field, the S-type fusion protein is used to produce E. coli. The results show that the molecular weight of the target gene product is determined by the molecular weight of the target gene product. In this case, it is necessary to make a thorough investigation into the situation. The host computer is connected to the computer, and the computer is connected to the computer. Now, in the middle of the field, it is not very active.