異常分泌タンパク質のペリプラズム生産に対する大腸菌のストレス応答の解析

大肠杆菌对异常分泌蛋白周质产生的应激反应分析

• 批准号: 08760068
• 负责人: 門倉 広
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760068/
• 关键词: 大腸菌; ペリプラズム; タンパク質分泌; ストレス応答

これまでの実験ではストレスの原因となる、異種タンパク質のペリプラズムへの分泌生産の誘導は、アルカリ性ホスファターゼのプロモーターを利用して行っていた。これにはリン酸を含む培地から欠乏する培地への培地交換を必要とする。そこでより簡便に融合遺伝子の発現を誘導するため、強力でしかもIPTGによる制御が可能なtacプロモーターの下流に当該融合遺伝子を導入した。tacプロモーターから遺伝子発現を誘導したところこれまでのペリプラズムプロテアーゼDegPを欠損する大腸菌を宿主に用いた場合だけでなくdegP^+株を宿主とし場合にもPreS2のペリプラズムへの蓄積が認められた。この際これまでの3種類のタンパク質に加え48kDaのタンパク質が誘導合成を認めた。分子量およびDegP欠損株では誘導されないことからこの48kDaタンパク質はDegPであると予想された。そこでストレス下の大腸菌からmRNAを調製しノザン解析によりdegPmRNA量を調べたところその転写量は非ストレス下の大腸菌のものと比較し5倍から7倍に上昇していた。Prinston大のSilhavyらは、大腸菌外膜リポタンパク質NlpEの過剰生産によりDegPの発現が誘導されることを示している。そこでこの現象との比較を行うためにnlpEをtacプロモーターの下流にクローン化し、パルスチェイス実験をおこなったところNlpEそのものに加え既に報告のあるDegP(48kDa)とまだ未報告の37Kdaのタンパク質の発現量が顕著に上昇した。私の現象とDegP以外は異なるタンパク質が誘導されてくることから両者は異なる現象であると予想される。以上の経緯のように交付申請書作製時の34kDaタンパク質にかえ48kDaタンパク質の解析を行う結果となった。その結果、異種タンパク質のペリプラズム生産に伴いペリプラズムプロテアーゼDegPが誘導合成されることおよびこの誘導は転写レベルで行われることを明らかにした。

The cause of the accident is different, the cause of the disease is different, the cause of the disease is different, the cause is different. It means that there is a lack of land cultivation, a lack of land training, a lack of If you want to make sure that you have a problem, you can see that you need to make sure that you have a problem, and that you may be able to control the situation that you need to tac it. You should use it when you want to integrate it. In the tac system, you need to know that you need to know that the DegP is not available to the host, and that the host uses the combination of the host and the PreS2 to save the virus. This is the most important thing in this paper. In addition, we need to make sure that the 48kDa information is not available. The molecular weight of the DegP is lower than that of the plant. The molecular weight of the plant is lower than that of the plant. The molecular weight of the plant is lower than that of the plant. The molecular weight of the plant is lower than that of the plant. The molecular weight of the plant is lower than that of the plant, and the molecular weight of the plant is lower than that of the plant. The molecular weight of DegP is lower than that of the plant, and the molecular weight of DegP is lower than that of the plant. In the lower part of the table, the number of bacteria is mRNA, the quantity of bacteria is 5 times higher than that of the control group, and the number of bacteria in the lower part is 5 times higher than that of the other seven times. The Prinston Silhavy, the outer membrane of the fungus, the NlpE, the DegP of the bacteria, the external membrane of the fungus, and the outer membrane of the fungus were detected. This is not true. Do you want to read nlpE? tac? For example, outside the DegP, you may want to know if you want to. At the time of the delivery of the above application, the 34kDa will not be required. The 48kDa will be analyzed and the results will be verified. The result of the experiment, the results of the experiment, the results of the experiments, the results and the results of the results, the results and the results.