腫瘍壊死因子(TNF)のプロセシング機構

肿瘤坏死因子（TNF）的加工机制

• 批准号: 05760074
• 负责人: 内海 俊彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760074/
• 关键词: 腫瘍壊死因子(TNF); プロセシング; 小胞体; 膜通過

マクロファージが産生する腫瘍壊死因子(TNF)は活性を有する膜結合型の前駆体として細胞表層に出現した後、プロテアーゼによる切断に伴い分泌されるが、そのプロセシングの分子機構の詳細は不明である。本研究では、このTNFのプロセシングの初期段階であるTNF前駆体の小胞体膜通過・膜局在化の分子機構の解明を目的として、76残基から成るTNF前駆体領域についてPCR法等を用いた部位特異的変異体作製法により種々の欠失変異体を作製し、犬膵臓小胞体膜を用いたin vitro転写・翻訳系により小胞体膜通過・膜局在化を検討することにより、TNF前駆体領域中の小胞体膜通過・膜局在化に直接関与する領域の検索を行ない以下の結果を得た。1)TNF前駆体の小胞体膜通過・膜局在化は前駆体領域中のN末端側領域(-76〜-31)のみで生ずる。2)この領域中の-58、-57位(Lys残基)、-49、-48位(Arg残基)の陽価電のクラスター、さらにそのN末端側に存在する荷電性アミノ酸は小胞体膜通過・膜局在化には必須でない。3)これに対してこの領域中に存在する16残基から成る疎水領域(-46〜-31)は膜通過・膜局在化に必須であり、この領域中のアミノ酸残基の欠失により小胞体膜通過・膜局在化は完全に阻害される。以上の結果から、TNF前駆体では、-46〜-31に存在する疎水領域がinternal signal anchor sequenceとして機能し、II型の膜結合型TNFを生ずるものと推定された。

The molecular mechanism of TNF, which is produced and secreted by membrane bound precursor, is unknown. In this study, the early stages of TNF production were studied, and the molecular mechanism of TNF precursor membrane passage and membrane organization was elucidated. The molecular mechanism of TNF precursor was analyzed by PCR method. The site-specific variant method was used to produce TNF precursor membrane passage and membrane organization. The following results were obtained from the analysis of TNF precursor domain in small cell membrane through membrane transformation 1)TNF precursor small cell membrane passage·membrane bureau in the N-terminal side of the precursor field (-76 ~-31) and the heart of the birth 2) In this domain, the positive charge at position-58,-57 (Lys residue),-49,-48 (Arg residue) and the negative charge at the N-terminal side are necessary for cell membrane passage and membrane localization. 3) The presence of 16 residues in this domain prevents the formation of water domain (-46 ~-31), which is necessary for membrane passage and membrane transformation, and the absence of acid residues in this domain completely prevents the passage of small cell membrane and membrane transformation. These results suggest that TNF precursor is present in the presence of an internal signal anchor sequence, a functional domain, and a membrane-bound TNF type II.