ウイルスフリー親魚選別のためのPCR法の開発

开发无病毒亲鱼选择PCR方法

• 批准号: 05760153
• 负责人: 西澤 豊彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760153/
• 关键词: Viral nervous necrosis; Nodavirus; PCR

1.ウイルス検出のためのPCR法の開発1)純化したSJNNV(シマアジ神経懐死症原因)からフェノール法で核酸を抽出し、構造蛋白質遺伝子(RNA2)をプラスミドベクターにクローニングして、長さ約1,400塩基のRNA2のうち1,289塩基の配列を決定した。2)この塩基配列を基にRNA2の一部の領域(426b)を特異的に増幅するためのPCR用プライマーを合成しPCRの条件設定を行った。3)設定した条件下でPCRを行った結果、SJNNV核酸からRNA2に相補的な長さ約430塩基対のDNAが増幅された。またシマアジ病魚から抽出した核酸を用いてPCRを行ったところ同様のDNAが増幅され、PCR法によるSJNNVの検出系が確立された。2.PCR法による親魚からのウイルス検出1)シマアジ産卵親魚の卵巣液あるいは精巣液をカニューレで採取し、遠心分離上清を材料として前述のPCR法によるウイルス検査を行った結果24尾中6尾からウイルスが検出された。2)これらの親魚群を用いて実験室レベルで産卵飼育試験を行ったところ、ウイルス陰性親魚から得た仔魚からウイルスは検出されなかったが、陽性親魚からの仔魚はふ化翌日からウイルス陽性となり、ふ化後6日目に全滅した。3)以上の結果から、垂直感染の防除法として、PCR法によるシマアジ産卵親魚選別の有効性が示唆された。4)一方、本法を用いて神経壊死症の発生が見られたときのキジハタ産卵親魚群(200尾)のウイルス検査を試みたが、ウイルス陽性親魚は見いだされなかった。従って、キジハタ神経壊死症の感染経路はシマアジとは異なっている可能性が示唆された。

1. Development of PCR method for detection of DNA 1) Purification of SJNNV(cause of neurosis) 2) Determination of nucleic acid extraction and protein gene (RNA2) sequence for RNA2 with a length of about 1,400 nucleotides and an alignment of 1,289 nucleotides 2) A part of the RNA2 domain (426b) is specifically amplified for PCR and PCR conditions are set. 3)Under the conditions set, the PCR results showed that the length of SJNNV nucleic acid and RNA2 complement increased by about 430 bp. DNA amplification by PCR was established. 2. PCR method for the detection of brood fish eggs 1) The sperm fluid of brood fish eggs was collected and separated from the supernatant by telecentral separation. The PCR method for the detection of brood fish eggs was used. 2) The female parent fish was used for spawning and rearing. The female parent fish was used for spawning and rearing. The female parent fish 3)The results showed that: (1) the vertical infection was prevented by PCR, and (2) the spawning parent fish was isolated by PCR. 4)In this paper, we use the method to detect the occurrence of neurosis in female parent fish (200 fish). The infection pathway of neurosis is different from that of other diseases.

项目成果

T.Nishizawa.et al.: "Polymerase chain reaction(PCR)amplification of RNA of striped jack nervous necrosis virus(SJNNV)" Diseases of aquatic organisms. (印刷中). (1994)

T.Nishizawa.et al.：“条纹杰克神经坏死病毒（SJNNV）RNA 的聚合酶链式反应（PCR）扩增”水生生物疾病（1994 年）。