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ナトリウム・ミオイノシトール共輸送体の分子生物学的・電気生理学的研究

钠肌醇协同转运蛋白的分子生物学和电生理学研究

基本信息

批准号：
05770038
负责人：
挾間章博
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ナトリウム・ミオイノシトール共輸送体のcRNAをアフリカツメガエル卵母細胞に注入し、2本微小電極による膜電位固定法を行った。細胞外Na存在下でミオイノシトール(MI)を与えると濃度依存性に内向電流(膜電位0mV--150mV)が観察された。K_<0.5>^<MI>は約50muMであり、電位依存性は認められなかった。また、この電流は細胞外Na非存在下では内向電流は消失し、Na電流であることが明らかになった。K_<0.5>^<Na>には電位依存性があり、76mM(-50mV)から40mM(-150mV)という値であった。またヒル係数は1.9であり電位非依存性であった。このことから1個のMIにたいして2個のNaが運ばれるものと考えられた。またこの電流は、ナトリウム・グルコース共輸送体の阻害剤であるphlorizinにより抑制を受けた。さらに基質特異性を調べるために、種々の糖質を50mM投与し、-150mVで得られる電流を比較した。その結果、MI>L-fucose>L-xylose>L-glucose,D-glucose,a-methyl-D-glucose>D-galactose,D-fucose,3-0-methyl-D-glucose,2-deoxy-D-glucose>D-xyloseという順序が得られた。また、細胞外Na存在下で、voltage stepを与えると、一過性電流がえられ、この一過性電流はphlorizinにより消失した。この一過性電流については既にナトリウム・グルコース共輸送体で報告されたゲート様電流と同じ性質のものであると予想された。以上のように卵母細胞発現系において、ナトリウム・ミオイノシトール共輸送体の電気生理学的性質を詳細に調べることに成功し、この結果は平成6年3月の生理学会にて発表される予定である。

cRNA of co-transporter was injected into oocyte and membrane potential fixation method was carried out with 2 microelectrodes. In the presence of extracellular Na, the concentration-dependent inward current (membrane potential 0mV--150 mV) was observed. K_<0.5>^<MI>~ 50muM, potential-dependent. In the absence of extracellular Na, inward current disappears, Na current disappears. K_<0.5>^<Na>is the potential dependence of K_ ^, 76mM(-50mV), 40mM(-150mV), and 40mM(-50mV). The coefficient is 1.9 and the potential is independent. The first is the second is the third. The current of the carrier is reduced by the phlorizin. The substrate specificity was modulated by 50mM of glucose and-150 mV of current. MI>L-fucose> L-xylose>L-glucose,D-glucose,a-methyl-D-glucose>D-galactose,D-fucose,3-0-methyl-D-glucose,2-deoxy-D-glucose>D-xylose. In the presence of extracellular Na, voltage step and transient current disappear. This transient current is not only a matter of time, but also a matter of time. The results of detailed regulation of the electrophysiological properties of oocyte development system described above were successful, and the results were compared with those predicted by the Institute of Physiology in March 2006.