Wilms腫瘍の癌抑制遺伝子WTlの遺伝子産物の機能解析

肾母细胞瘤抑癌基因WTl基因产物的功能分析

• 批准号: 05770141
• 负责人: 守山 正胤
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770141/
• 关键词: 癌抑制遺伝子; 転写因子; Zinc finger protein; Wilsms腫瘍

Wilms腫瘍の癌抑制遺伝子WTlは4つのzinc fingerドメインを有する転写因子をコードしている。WT1産物の構造上の特徴としてalternative splicingによって4つのzinc fingerのうち第3fingerと第4fingerのあいだにLys-Thr-Ser(KTS)の3アミノ酸があるもの(WT-KTS+産物)とないもの(WT-KTS-産物)が存在することが知られている。これまでWTl産物の機能としてKTS-産物がEGRl結合配列(GCGGGGGCG)に特異的に結合してこの配列をプロモーターに持つ遺伝子(IGF2,PDGF A chainなど)の転写活性を抑制することが報告されている。 我々はこれまで human fetal kidneyのcDNAライブラリーから、既に報告された2種類以外に第3zinc finger全体がspliceされたWTldelF3産物を単離した。WTdelF3産物はこれまでWTlにmutationのあるWilms腫瘍にのみ発現するaberrantな蛋白質と考えられてきたが、われわれはRT-PCR法により同産物が正常組織でも発現することを見いだした。さらにこの産物の機能を知る目的でその結合配列を検索したところ、EGRl結合配列とは異なる特異的な配列(GTGTGGAGT)に結合することが明らかになった。さらにこの配列をPDGFAchain遺伝子のプロモーターに組み込んでその転写活性をCAT assayで検討したところ、WTldelF3産物は転写活性を抑制性に制御することが分かった。

Wilms肿瘤抑制基因WTL编码具有四个锌指域的转录因子。作为WT1产品的结构特征，众所周知，在四个锌指的手指中，有三个氨基酸（WT-KTS+产品），另一种没有四个锌指的（WT-KTS-PRODUCT），其中四个锌指的是第三个手指和第四个手指和第四个手指中的Lys-Thr-thr-thr-thr-thr-ser-thr-ser（kts+产品）。据报道，作为WTL产物的函数，KTS产品特异性结合了EGRL结合序列（GCGGGGGGCG），并抑制携带该序列作为启动子（IGF2，PDGF A链等）的基因的转录活性。我们先前从人类胎儿肾脏cDNA文库中分离出具有第三个锌指剪接的WTDELF3产品，该产品具有第三个锌指剪接。 WTDELF3产物先前被认为是一种异常蛋白，仅在WTL中具有突变的Wilms肿瘤中表达，但我们发现相同的产物通过RT-PCR在正常组织中表达。此外，搜索结合序列以理解该产品的功能，发现它与特定序列（GTGTGGAGT）结合，该序列与EGRL结合序列不同。此外，该序列被纳入PDGFACAN基因的启动子，并使用CAT测定法检查了其转录活性，发现WTDELF3产物的抑制作用可以调节转录活性。