Wilms腫瘍の癌抑制遺伝子WTlの遺伝子産物の機能解析

肾母细胞瘤抑癌基因WTl基因产物的功能分析

• 批准号: 05770141
• 负责人: 守山 正胤
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770141/
• 关键词: 癌抑制遺伝子; 転写因子; Zinc finger protein; Wilsms腫瘍

Wilms腫瘍の癌抑制遺伝子WTlは4つのzinc fingerドメインを有する転写因子をコードしている。WT1産物の構造上の特徴としてalternative splicingによって4つのzinc fingerのうち第3fingerと第4fingerのあいだにLys-Thr-Ser(KTS)の3アミノ酸があるもの(WT-KTS+産物)とないもの(WT-KTS-産物)が存在することが知られている。これまでWTl産物の機能としてKTS-産物がEGRl結合配列(GCGGGGGCG)に特異的に結合してこの配列をプロモーターに持つ遺伝子(IGF2,PDGF A chainなど)の転写活性を抑制することが報告されている。 我々はこれまで human fetal kidneyのcDNAライブラリーから、既に報告された2種類以外に第3zinc finger全体がspliceされたWTldelF3産物を単離した。WTdelF3産物はこれまでWTlにmutationのあるWilms腫瘍にのみ発現するaberrantな蛋白質と考えられてきたが、われわれはRT-PCR法により同産物が正常組織でも発現することを見いだした。さらにこの産物の機能を知る目的でその結合配列を検索したところ、EGRl結合配列とは異なる特異的な配列(GTGTGGAGT)に結合することが明らかになった。さらにこの配列をPDGFAchain遺伝子のプロモーターに組み込んでその転写活性をCAT assayで検討したところ、WTldelF3産物は転写活性を抑制性に制御することが分かった。

Wilms tumor suppressor gene WT1 has a 4-fold zinc finger response factor. The structural characteristics of WT1 product are as follows: (WT-KTS+ product),(WT-KTS-product), and (WT-KTS-product). The function of the WTl product is to inhibit the binding activity of the EGR1 binding ligand (GCGGGCG) to the KTS-product and to inhibit the binding activity of the EGR1 binding ligand (IGF2,PDGF A chain). We report that the human fetal kidney cDNA fragment is isolated from the 3 rd zinc finger fragment except for the 2 species WTldelF3. WTdelF3 products are found in mutant tissues by RT-PCR. For the purpose of understanding the function of the product, the binding sequence of EGR1 and EGR2 is described in detail below. In addition, the PDGFAchain gene has been selected for the CAT assay and WTldelF3 gene has been selected for the inhibition of the CAT assay activity.