BCL10遺伝子変異の分子メカニズム

BCL10基因突变的分子机制

基本信息

批准号：
12877032
负责人：
守山正胤
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877032/
关键词：
染色体転座 BCL10遺伝子 frameshift mutation MALT 悪性リンパ腫

项目摘要

BCL10遺伝子はt(1;14)(p22;q32)をもつmucosa associated lymphoid tissue(MALT)lymphoma症例の転座切断点近傍から今年単離された(Cell,96,35,1999;Nature Genet.,22,63,1999)。当初は転座によってもたらされるBCL10の構成的過剰発現がlymphomagenesisに重要と考えられたが、その後転座の有無に関わらずそのopen reading frame(ORF)内にpointmutationが高頻度に発見された。しかもしばしばframeshiftmutationによりC末の欠失したtruncated productが発現すること、さらにfull length BCL10はrat embryo fibroblast(REF)に過剰発現するとapoptosisを誘導するのに対して、C末の欠失したtruncated productはapoptosis誘導能を失い、逆にREFをtransformする形質を獲得することが示された(Cell,96,35,1999)。さらに注目されたことはこれらのmut ationがMALT lymphomaだけでなく、精巣腫瘍、悪性中皮腫、大腸癌、肺癌などの固形腫瘍でも認められたことである。一方、その後、これらの腫瘍ではゲノムDNAにmutationが見られないとの報告もあり、議論がある(Cell,97,683,1999)。私は、BCL10 mutationのメカニズム明らかにしたいと考え、以下のようなprelimilaryな結果を得た。BCL10 truncated proteinの発現を解析する目的で、バーキットリンパ腫細胞株,Ramos,Bjab;T細胞株,Molt4,Jurkat;大腸癌細胞株,Colo201;食道癌細胞株,TE1;胃癌細胞株,MKN28ならびに正常扁桃よりmRNAを抽出してfull length ORFをカバーするようにRT-PCRを行った。この際、forward primerの5'側にT7-promoterとKozak配列をもつリンカーを付加した。このprimerを使うとPCR productにpromoterとKozak配列を付加でき、直接in vitro translationに導入すればBCL10蛋白質を合成できる。そこで、[^<35>S]-methionineでラベルしたin vitro translation productを抗BCL10抗体で免疫沈降して解析したところ、それぞれの細胞で発現しているtruncated BCL10 proteinが複数のバンドとして検出された。PCR産物をクローニングし、シーケンスしたところ、特定のframeshift mutationによるものであることが判明した。これらのmutationは正常扁桃でも検出されたことから、BCL10mutationは正常細胞でも起こっていることを発見した。さらに驚いたことにゲノムDNAにはmutationが見られず、mutationが転写後何らかのメカニズムにより導入されていることが示唆された。

今年从粘膜相关的淋巴组织（MALT）淋巴瘤病例中与T（1; 14）（P22; Q32; Q32; Q32; Q32; Q35，1999;自然基因，22，63，1999）中分离出Bcl10基因。最初，由易位引起的BCL10的本构过表达对淋巴细胞造成很重要，但是随后在其开放阅读框架（ORF）中经常发现尖位，而不管它是否被转移。此外，已经表明，C末端缺失的截短产物通常通过移屏命名表达，并且在大鼠胚胎成纤维细胞（参考）中过表达过表达时，Bcl10会诱导凋亡，而C末端删除的截短产物会失去其诱导其诱导的，并诱导3个小组，并诱导3个小组，以3个元组，触发了3个小组。进一步值得注意的是，这些突变不仅在麦芽淋巴瘤中发现，而且在诸如睾丸肿瘤，恶性间皮瘤，结肠癌和肺癌等实体瘤中也发现了这些突变。另一方面，随后有报道称，在这些肿瘤中没有发现突变，并且存在争议（Cell，97，683，1999）。我想阐明Bcl10突变的机制，并得到以下初步结果：为了分析Bcl10截断蛋白的表达，进行了RT-PCR以从Burkitt淋巴瘤细胞系，Ramos，Bjab提取mRNA； T细胞系，Molt4，Jurkat；结肠癌细胞系，Colo201；食管癌细胞系TE1；胃癌细胞系，MKN28和正常扁桃体，并覆盖全长的ORF。目前，将带有T7启动器和Kozak序列的连接器添加到前向引物的5'侧。使用此底漆，可以将启动子和Kozak序列添加到PCR产物中，并且可以通过将它们直接引入体外翻译来合成Bcl10蛋白。因此，当通过使用抗BCl10抗体的免疫沉淀分析用[^<35> s] - 甲硫氨酸标记的体外翻译产物时，在每个细胞中表达的截短的Bcl10蛋白被检测为多个频段。将PCR产物克隆和测序，并发现是由于特定的移率突变引起的。在正常扁桃体中也检测到了这些突变，我们发现BCL10MONT也发生在正常细胞中。更令人惊讶的是，在基因组DNA中没有发现突变，这表明转录后某种机制引入了突变。