化学発光基質を用いたin situ hybridization高感度検出系の開発

开发使用化学发光底物的高灵敏度原位杂交检测系统

• 批准号: 05770145
• 负责人: 鈴木 幸一
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: 山梨医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770145/
• 关键词: 化学発光; in situ hybridization

In situハイブリダイゼーションの検出系には、ブローブに放射性同位元素を標識しオートラジオグラフィーで検出する方法や、プローブに何らかの分子を導入しそれを抗体等で検出して最終的に酵素基質反応で可視化する方法などが採られている。今回試みた化学発行基質はフィルターハイブリダイゼーションにおいて最近用いられるようになり、放射性同位元素を使わないという利点があるとともに高感度である。化学発行基質の組織学的検出系への応用という観点から考えると、既に広く用いられている酵素抗体法においても同様に応用され得るはずである。この点に着目して、まず酵素抗体法で予備検討を行った。対象として手術材料から得られたヒト扁桃を用い、ホルマリン固定、パラフィン包理切片を作製し、細胞増殖マーカーであるPCNAまたはMIB-1の1次抗体希釈系列を反応、2次抗体にペルオキシダーゼまたはアルカリフォスファターゼ標識抗体を用い、基質として前者にはECL検出試薬(Amersham)を後者にはスマイライトルミステイン(住友金属)を反応させた。化学発光の検出にはArgus-50/VIM3(浜松ホトニクス)を用いた。通常の光学顕微鏡レベルの酵素抗体法では1次抗体至適希釈倍率は500倍であったが、化学発光基質をではいづれの基質を用いた場合でも5000倍から10000倍が適当であり、それより濃いと非特異的発光が強く見られた。すなわち常法より10倍から20倍の検出感度が得られた。次に、ヒト子宮頚部組織を用いパピローマウイルスDNAに対するプローブを用いたin situハイブリダイゼーションで検討を行い、本法が検出系として応用可能であることを確認した。すなわち、化学発行基質の組織学への応用により、放射性同位元素を用いない高感度検出系を確立可能であることが示された。今後、検出に用いる装置の簡略化および分解能の向上がより進めば、組織学の分野でも広く用いられる可能性のある方法と考えられる。

In situ is sensitive to the presence of radioactive isotopic elements, such as the identification of radioactive isotopic elements, the export of the method, the introduction of molecules into the antibody, and so on. The most important enzyme base can be converted into the method. This time, we will try to use the chemical system to improve the sensitivity of the chemical system. This is the latest attempt to use radioactive isotopic elements to improve the sensitivity of the chemical system. In the field of basic chemistry, the system of chemistry has been used in the field of chemistry and chemistry. In this paper, we have used the method of enzyme antibody in the study of chemical chemistry. Please focus on the target, and the enzyme antibody method should be used. For example, the use of almond products, the fixation of almonds, the preparation of wrapping slices, the detection of antibodies, the use of antibodies. The former