リコンビナントTLR融合蛋白を用いた病原体バイオセンサーの開発

利用重组TLR融合蛋白开发病原体生物传感器

• 批准号: 18659128
• 负责人: 鈴木 幸一
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659128/
• 关键词: TLR; 病原体; センサー; 分子間相互作用; 融合タンパク; QCM; SPR

環境中に存在する様々な病原微生物を迅速かつ高感度に検出する方法はなく、そのような手法の開発が望まれている。TLRのようなパターン認識受容体と病原体構成成分は無細胞系でも結合が起こることから、これをバイオセンサーとして利用する可能性に関する基礎研究を行った。非メチル化CpGモチーフを認識するヒトTLR9のリガンド結合部位であるleucin-rich repeatを含む細胞外ドメインと、免疫グロブリンFc部分とを融合させた蛋白を発現するようなプラスミドを構築した。作製したプラスミドを大腸菌にトランスフォーメーションして大量調整し、これをHEK293細胞を用いた大量発現系で発現させ、TLR融合蛋白をプロテインGアフィニティー精製した。このTLR9融合蛋白とそれらに対応する既知のリガンドである非メチル化CpGオリゴDNAやTLR9刺激能を欠くコントロールDNAなどとの分子間相互作用を表面プラズモン共鳴(SPR)、および水晶発振子マイクロバランス(QCM)法の2種類の方法によって定量的に測定を試みた。その結果、SPRでは測定系が不安定であったが、QCMを用いることでCpG DNA特異的に分子間相互作用を高感度に検出可能であり、用いる塩基配列による親和性の差も検出できることが明らかとなった。一方で、TLR2融合蛋白も同様に作製し、リガンドであるpeptidoglycanとの結合を評価したが、満足できる特異性は得られなかった。本研究成果によって、将来的に複数のTLR融合蛋白を組み合わせて用いることで、様々な種類の病原体を検出するバイオセンサーが開発できる可能性が示唆された。

Environment exist に す る others 々 な pathogenic microorganisms を quickly か つ Gao Gan degrees に 検 out す る method は な く, そ の よ う な gimmick の open 発 が hope ま れ て い る. TLR の よ う な パ タ ー ン know the capacity of body composition は と pathogens without cell line で も combining が up こ る こ と か ら, こ れ を バ イ オ セ ン サ ー と し て using す る possibility に masato す る basic research line を っ た. Non メ チ ル the CpG モ チ ー フ を know す る ヒ ト TLR9 の リ ガ ン ド combining site で あ る leucin - rich repeat を containing む extracellular ド メ イ ン と, immune グ ロ ブ リ ン Fc part と を fusion さ せ た protein を 発 now す る よ う な プ ラ ス ミ ド を build し た. Cropping し た プ ラ ス ミ ド を coliform に ト ラ ン ス フ ォ ー メ ー シ ョ ン し て adjust し, こ れ を を HEK293 cells with い た large 発 now is で 発 now さ せ, TLR fusion protein を プ ロ テ イ ン G ア フ ィ ニ テ ィ ー refined し た. こ の TLR9 fusion protein と そ れ ら に 応 seaborne す る already know の リ ガ ン ド で あ る non メ チ ル the CpG オ リ ゴ DNA や TLR9 can stimulate を owe く コ ン ト ロ ー ル DNA な ど と の intermolecular interactions を surface プ ラ ズ モ ン resonance (SPR), お よ び 発 crystal oscillator マ イ ク ロ バ ラ ン ス method (QCM design) の 2 kinds に の method Youdaoplaceholder0 quantitative に determination を test みた. そ の results, SPR で は measurement system が unrest で あ っ た が, QCM design を with い る こ と で CpG DNA specific に intermolecular interactions を Gao Gan degrees に 検 makes possible で あ り, use い る salt base with column に よ る affinity の poor も 検 out で き る こ と が Ming ら か と な っ た. Side で も, TLR2 fusion protein with others に as し, リ ガ ン ド で あ る peptidoglycan と の combining を review 価 し た が, against foot で き る specificity は must ら れ な か っ た. This research に よ っ て, future に plural の TLR fusion protein を group み close わ せ て in い る こ と で, others 々 な kinds の pathogens を 検 out す る バ イ オ セ ン サ ー が open 発 で き が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

世界のハンセン病の現況

世界麻风病现状

• 发表时间: 2005
• 期刊: 日本ハンセン病学会誌 75
• 作者: Hamada A;et al.;石井則久
• 通讯作者: 石井則久

Multivalent DNA vaccine protects mice against pulmonary infection caused by Pseudomonas aeruginosa

• DOI: 10.1016/j.vaccine.2006.05.077
• 发表时间: 2006-09-11
• 期刊: VACCINE
• 影响因子: 5.5
• 作者: Saha, Sukumar;Takeshita, Fumihiko;Okuda, Kenji
• 通讯作者: Okuda, Kenji

ハンセン病制圧後のハンセン病対策戦略。

根除麻风病后控制麻风病的策略。

• 发表时间: 2006
• 期刊: 日本ハンセン病学会誌 75
• 作者: Honma;S.;et al.;Kazutake Hirooka;Yasutaro Fujita;Kei Asai;Hiroshi Matsuoka;Mitsuo Ogura;Ken-ichi Yoshida;藤田泰太郎;松岡 浩史;東條 繁郎;Yasutaro Fujita(著・編);M. Hatakeyama;Kazuhiro Matsumoto;I. Tsuda;Y. Fukushima;伊藤孝男;Y.Yamaguti;K.Matsumoto;S.Tadokoro;津田一郎;津田一郎;S. Kuroda;H. Fujii;I. Tsuda;津田一郎;津田一郎;津田一郎;I. Tsuda;I. Tsuda;I. Tsuda;津田一郎(監訳);津田一郎(監訳);津田一郎(監訳);佐藤譲(訳);Rocchi R;Yamazaki K;Sellitti D;Jounai N;石井 則久;Nakanaga K;Saha S;Takeshita F;Hasan UA;石井 則久;赤間 剛;永岡 譲;中永 和枝;Takeshita F;Hasan UA;Suzuki K;Suzuki K;Takeshita F;Suzuki K;Sasaki S;Saha S;Saha S;鈴木幸一;石井則久;鈴木幸一;鈴木幸一;石井則久;石井則久
• 通讯作者: 石井則久

らい菌感染マクロファージ内における菌の寄生と排除に関わる分子機構の相互作用

麻风分枝杆菌感染的巨噬细胞内细菌寄生和清除相关分子机制的相互作用

• 发表时间: 2007
• 作者: Honma;S.;et al.;Kazutake Hirooka;Yasutaro Fujita;Kei Asai;Hiroshi Matsuoka;Mitsuo Ogura;Ken-ichi Yoshida;藤田泰太郎;松岡 浩史;東條 繁郎;Yasutaro Fujita(著・編);M. Hatakeyama;Kazuhiro Matsumoto;I. Tsuda;Y. Fukushima;伊藤孝男;Y.Yamaguti;K.Matsumoto;S.Tadokoro;津田一郎;津田一郎;S. Kuroda;H. Fujii;I. Tsuda;津田一郎;津田一郎;津田一郎;I. Tsuda;I. Tsuda;I. Tsuda;津田一郎(監訳);津田一郎(監訳);津田一郎(監訳);佐藤譲(訳);Rocchi R;Yamazaki K;Sellitti D;Jounai N;石井 則久;Nakanaga K;Saha S;Takeshita F;Hasan UA;石井 則久;赤間 剛;永岡 譲;中永 和枝;Takeshita F;Hasan UA;Suzuki K;Suzuki K;Takeshita F;Suzuki K;Sasaki S;Saha S;Saha S;鈴木幸一;石井則久;鈴木幸一;鈴木幸一;石井則久;石井則久;石井則久;野口義彦;Huhehasi Wu;山崎 和子;谷川 和也;中永 和枝;谷川 和也
• 通讯作者: 谷川 和也

Suppression of iodide uptake and thyroid hormone synthesis with stimulation of the type I interferon system by double-stranded RNA(dsRNA) in cultured human thyroid follicles

在培养的人甲状腺滤泡中通过双链 RNA (dsRNA) 刺激 I 型干扰素系统抑制碘吸收和甲状腺激素合成

• 发表时间: 2007
• 期刊: Endocrinology 148
• 作者: Yamazaki K;Suzuki K;Yamada E;Yamada T;Takeshita F;Matsumoto M;Mitsuhashi T;Obara T;Takano K;and Sato K.
• 通讯作者: and Sato K.