紫外線照射によって誘導されるIL8の遺伝子発現調節機構に関する研究

紫外照射诱导IL8基因表达调控机制研究

• 批准号: 05770168
• 负责人: 山越 智
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: 国立予防衛生研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770168/
• 关键词: ヒト好中球走化性因子; IL-8; gro; ENA-78

紫外線が皮膚の表面に照射されたときには様々な生体反応が起こると考えられ、炎症反応もその一反応であると考えられる。本実験ではモデル系としてヒトケラチノサイト様癌細胞を用い、それに対してUV-C照射を施した時に産生されるIL8をはじめとする好中球走化性因子の産生についての解析を行った。ケラチノサイトとしてヒト毛胞細胞由来癌細胞DJM1を用い、UV-Cをdose(5J/m^2,10J/m^2,20J/m^2)を変えて照射し6時間後のヒト好中球走化活性を測定したところdoseに依存して活性が検出された。そこで、この条件でさらに高dose(30J/m^2,40J/m^2,50J/m^2)までとりIL-8をプローブとしたノーザンハイブリダイゼーションを行った。その結果、10J/m^2よりstady state levelでのmRNAの誘導が検出され30J/m^2で最大誘導を示した。30J/m^2でのIL-8の誘導のtime courseを調べた結果、4時間後よりmRNAの蓄積がみられ12時間後あたりで最大活性値を示した。このmRNAの蓄積には転写レベルのactivationが関与することが核のrun-offアッセイによって明らかになった。さらにmRNAのstabilityを調べた結果、UV照射により3倍程度のstabilityの上昇が見られた。これらのことから、IL-8のmRNAの増加は転写の活性化とmRNAの安定化によることが明らかになった。これらの誘導に関わるシグナル伝達に蛋白質合成が関与するかどうかcycloheximideを用いて調べた。その結果mRNAのsuper-inductionが見られ蛋白質合成が関与しないことが判明した。DNA除去修復能を欠くxeroderma pigmentosumの細胞であるXP20S(SV)細胞に対してUV照射を施したところ高感受性になり5J/m^2で、すでに最大誘導量を示した。このことは、シグナル伝達においてDNA損傷が関与することを示唆するものである。IL-8ファミリーには、gro、ENA-78等が知られるがそれらmRNAの誘導についてもついてもPCR法により解析した。その結果、groalpha,beta,gamma,ENA-78の4種類のmRNA誘導に関して調べたが、grobeta,gamma,ENA-78に関してDJMI細胞ではmRNAが検出されなかった。groalphaは検出されたが20J/m^2の条件ではUV照射によるmRNAの誘導は見られなかった。

Ultraviolet radiation on the surface of the skin causes inflammation. This paper describes the analysis of IL-8 produced by UV-C irradiation on cancer cells and the analysis of IL-8 produced by UV-C irradiation on cancer cells. Hairy cells derived from cancer cells DJM1 were irradiated with UV-C dose(5J/m^2, 10 J/m^2, 20 J/m^2) for 6 hours, and the activity of Hairy cells was measured. High dose(30J/m^2, 40J/m^2, 50J/m^2) The results showed that mRNA induction at 10J/m^2 was maximal at 30J/m^2. The time course of IL-8 induction at 30J/m^2 was adjusted, and the mRNA accumulation at 4 h was increased to 12 h. The mRNA accumulation is related to the activation of the gene. The stability of mRNA was modulated by UV irradiation, and the stability was increased by 3 times. The expression of IL-8 mRNA increased and the expression of IL-8 mRNA stabilized. The induction of these proteins is related to the regulation of cycloheximide. As a result, super-induction of mRNA was found to be involved in protein synthesis. DNA removal and repair ability in XP20S (SV) cells is not sufficient. UV irradiation is highly sensitive to 5J/m^2 and the maximum induction is shown. This is the first time that a DNA damage has occurred. IL-8, GRO, ENA-78, etc. are known to be involved in mRNA induction and analysis by PCR. The results showed that four types of mRNA, groalpha,beta, gamma, ENA-78, were induced in DJMI cells. The condition of alpha production was 20J/m^2, and the mRNA production was induced by UV irradiation.