好中球走化性蛋白質LECT2のレセプターのクローニング

中性粒细胞趋化蛋白 LECT2 受体的克隆

• 批准号: 09770163
• 负责人: 山越 智
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770163/
• 关键词: 好中球走化性蛋白質; レセプター; LECT2; クローニング

ヒトLECT2レセプターの検出系の確立及びLECT2レセプターを発現する培養細胞のスクリーニングを目的として、CHO細胞由来のヒト組み換え体LECT2(rLECT2)をペルオキシダーゼ法により常法にしたがって125Iラベルし、各種細胞に対して結合実験を行った。用いた細胞は、接着系の培養細胞としてHeLa細胞,HepG2,HuH-6を初めとする肝癌細胞6種、及びMC3T3-E1細胞、血球系癌細胞としてHL-60,U937,K562など15種類の細胞をPHA(5μg/ml),LPS(10μg/ml),PMA(1ng/ml)で24時間処理しBinding assayに供した。接着系細胞でのassayは、10cmのdish当たり1×10^6まいた細胞に対して1,2,4nMの標識LECT2を処理し、4℃で3時間インキュベーション後、細胞と上清の放射活性を測定した。また、特異的結合については標識LECT2添加1時間後に非標識LECT2を8μM加え、さらに2時間インキュベーションした。浮遊系細胞では、1サンプル当たり5×10^6細胞に対しtest tubeを使い同様の実験を行った。スクリーニングの結果、ヒト血球系細胞HuT-78,K562,マウス骨芽球系細胞MC-3T3-E1が候補として得られた。しかし、cDNAのクローニングの為のLECT2レセプターmRNAのsourceとしては発現レベルが低いことが予想されたため、現在、さらに別の細胞のスクリーニング、高感度Binding assay系の検討を行っている。

ヒ ト LECT2 レ セ プ タ ー の 検 out の established and び LECT2 レ セ プ タ ー を 発 now す る culture cell の ス ク リ ー ニ ン グ を purpose と し て, CHO cell origin の ヒ み ト group in え body LECT2 (rLECT2) を ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ method に よ り method often に し た が っ て 125 I ラ ベ ル し, all kinds of cell に し polices Youdaoplaceholder0 combined with the actual experiment を lines った. Use い は た cells, then の culture cell と し て HeLa, HepG2, early HuH - 6 を め と す る 6 kinds of liver cancer cells, and び MC3T3 E1 - cells, blood cells と し て HL - 60, U937, K562 な ど 15 kinds の cells を PHA (5 mu g/ml), LPS (10 mu g/ml) PMA(1ng/ml)で24 time for the treatment of the colonizing Binding assayに for <s:1> た. Then cell で の assay は, 10 cm の dish when た 1 x 10 ^ 6 ま り い た cells に し seaborne て 4-trichlorobenzene 1 nM の logo LECT2 を 処 し, 4 ℃ で 3 time イ ン キ ュ ベ ー シ ョ, cells after ン と supernatant の を radioactivity measurement し た. ま た, specific combination of に つ い て は logo LECT2 add に after 1 time not identify LECT2 を 8 microns え, さ ら に 2 time イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン し た. Planktonic cells で で, 1サ サ プ プ プ った when た サ 5×10^6 cells に were used to test the を tubeを to make the を similar to the <s:1> experiment を conduct った. ス ク リ ー ニ ン グ の results, ヒ ト blood cells HuT - 78, K562, マ ウ ス gemmule bone cell MC - 3 t3 - E1 が alternate と し て have ら れ た. し か し, cDNA の ク ロ ー ニ ン グ の is の LECT2 レ セ プ タ ー mRNA の source と し て は 発 now レ ベ ル が low い こ と が to think さ れ た た め, now, さ ら に don't の cells の ス ク リ ー ニ ン グ, Gao Gan Binding assay is の 検 line for を っ て い る.

项目成果

山越 智: "Molecular cloning,structural characterization and chremosomal mapping of human LECT2 gene." Genomics. (発表予定).

Satoshi Yamagoshi：“人类 LECT2 基因的分子克隆、结构表征和染色体作图”。

富沢一夫: "A panel set epitope analysis of myeloperoxidase (MPO) -spewfic antimutrophil cytoplasmic antibody MPO-ANCA using・・・・" J.Clinic.Immun.(発表予定).

Kazuo Tomizawa：“使用……对髓过氧化物酶 (MPO) 特异性抗嗜粒细胞胞质抗体 MPO-ANCA 进行小组表位分析”J.Clinic.Immun（待提交）。

山越 智: "Expression of a neutrophil caemotactic protein LECT2 in human hepatocytes revealed by immunochemical studies using polyclonal and ・・・" Biochem Biophis.Res.Commun.237. 116-120 (1997)

Satoshi Yamakoshi：“通过使用多克隆和……的免疫化学研究揭示了人肝细胞中中性粒细胞趋化蛋白 LECT2 的表达”Biochem Biophis.Res.Commun.237 (1997)。

伊藤三恵: "Proparation of rechombinat-histidine-tagged human LECT2,a chemotactic protein to neutrophil in Escherichia cooli" Cytotechnology. (発表予定).

Mie Ito：“重组组氨酸标记的人 LECT2 的制备，一种对大肠杆菌中的中性粒细胞的趋化蛋白”细胞技术（待提交）。

大谷 功: "Myeloperoxidase (MPO) Fragments reacting with a serum of patient with MPO-ANCA positive Glomerulernephritis." Journal of Infection and Chemotherapy. (発表予定).

Isao Otani：“髓过氧化物酶 (MPO) 片段与 MPO-ANCA 阳性肾小球肾炎患者的血清发生反应。”感染与化疗杂志（即将出版）。