イムノゴールド法を用いたインターalphaトリプシンインヒビター多型の高感度検出法の開発

免疫金法高灵敏检测间α胰蛋白酶抑制剂多态性方法的开发

• 批准号: 05770296
• 负责人: 木村 由紀子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: 山梨医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770296/
• 关键词: インターalphaトリプシンインヒビター; 血清蛋白; 等電点電気泳動法; イムノゴールド法

等電点電気泳動法およびイムノゴールド法を用いて血清中のインターalphaトリプシンインヒビター(ITI)型の判定を試みた。山梨県在住の健康成人より血液の提供を受けた。15U/mLノイラミニダーゼを血清9に対して1の割合で加え,37℃で一晩処理した。pH3.5〜9.5の両性単体を用いて厚さ0.25mmのポリアクリルアミドゲル平板を作成し,1000Vで30分間前泳動後資料をろ紙にしみこませて陰極側に置き,1000Vで210分間本泳動した。本泳動開始30分後にろ紙を除去した。泳動終了後,キャピラリー・ブロッテイング法で蛋白をゲルからニトロセルロース膜に転写した。この膜をトリス緩衝生理的食塩水(TBS)中で振とう洗浄して,3%ゼラチン/TBSに浸してブロッキングした。TBSで振とう洗浄後,TTBS(0.05%Tween20/TBS)で1/500に希釈したウサギ抗ヒトITI血清中で2時間振とうした。TTBSで洗浄後,TTBSで1/100に希釈したコロイド金結合ヤギ抗ウサギ血清中で1〜2時間反応させた。TTBSと蒸留水で洗浄後,現像液(0.11%乳酸銀,0.85%ハイドロキノン,0.2Mクエン酸/クエン酸ナトリウム,pH3.5)中で10〜20分間発色させ,ITI型を判定した。ITIについては現在のところ等電点電気泳動法により多数の表現型が報告されているが,今回用いた山梨県由来の資料からは,1型,2-1型,2型,3-1型,3-2型,3型,4-2型が観察された。新たにイムノゴールド法を導入することにより,これら全ての型について1/20程度に希釈した血清と実験的に作成した新鮮な凍結保存血痕からの型判定が可能であった。今後さらに改良を重ねて,各種温度条件下に放置した血痕からの型判定について試みていく予定である。

The isoelectric point electrophoresis method is used in serumーalpha トリプシンインヒビター(ITI) type judgment test. Yamanashi Prefecture provides blood to healthy adults living in Yamanashi Prefecture. 15U/mL ノイラミニダーを serum 9に対して1のcut and added, 37℃, one night treatment. The pH 3.5~9.5 neutral unit is made of a 0.25mm thick のポリアクリルアミドゲル plate, 10 00V is used for 30 minutes of front and back operation, and 1000V is used for 210 minutes of operation. The paper will be removed 30 minutes after this swimming starts. After the swimming is over, キャピラリー・ブロッテイング法でproteinをゲルからニトロセルロース片に転写した.この片をトリス桒トリスphysiologically buffered dietary water (TBS), で Vibration and rinsing, 3% ゼラチン/TBS, immersed in してブロッキングした. After washing with TBS, use TTBS (0.05% Tween20/TBS) with 1/500 Tween Tween anti-Tween ITI serum for 2 hours. After TTBS is washed, TTBS 1/100 に燈したコロイド金 combined with anti-ウサギ serum will react in 1 to 2 hours. After washing with TTBS and distilled water, the imaging solution (0.11% silver lactate, 0.85% ハイドロキノン, 0.2M クThe color of ethanoic acid / クエン acid ナトリウム, pH3.5) can be determined within 10 to 20 minutes, and the ITI type can be determined. ITIについてはNow Isoelectric point electrophoresis methodによりMost phenotypesが reportされているが, this time I will use it Information on the origin of Yamanashi Prefecture, type 1, type 2-1, type 2, type 3-1, type 3-2, type 3, type 4-2, type 4-2. New たにイムノゴールド法を Import することにより, これら全てのtype について1/20 degreeに燈したSerumと実験的に出したFreshなFrozen preservation of blood marksからのType judgmentがpossibleであった. In the future, we will improve the quality of the product, and we will try to determine the type of blood stains when placed under various temperature conditions.