実験的表皮細胞増殖系におけるC-mycとP-53の発現と細胞周期の検討

实验性表皮细胞增殖系统中 C-myc 和 P-53 表达及细胞周期的检查

• 批准号: 05770588
• 负责人: 橋本 喜夫
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770588/
• 关键词: tape-stripping系; 尋常性乾癬; C-myc; P-53; DNA-flow cytometry; 表皮turn over time; PKC inhibitor; カルモジュリン

古典的な実験的表皮増殖系であるtape-stripping系は現象的に尋常性乾癬の病態に酷似することが知られている。またC-mycおよびP-53が豚表皮細胞周期に与える影響は不明である。今回われわれはtape-stripping系を豚表皮に応用し、継時的に観察して、S期持続時間を測定し、角層の交代時間を含め、表皮turn over timeを算出した。またC-myc,P-53についてはABC法(免疫組織学的)で検討した。加えてヒト正常表皮の交代時間、乾癬皮疹部表皮および乾癬無疹部の交代時間も算出した。またG1,G2期の細胞周期の進行はprotein kinaseが関与していることがしられており、代表的なPKC(protein kinase C)inhibitorである。スタウロスポリンと、よりPKCに特異的なinhibitorであるカルフォスチンCの豚表皮細胞周期に与える影響も比較した。さらにG1期短縮をきたすといわれているカルモジュリン量をtape-stripping後の豚表皮において測定した。結果1)継時的に採皮し、DNA-flow cytometry,サイミジン取込み、mitosis算定で検討したところ、豚表皮S期持続時間は12時間であると推定し、dansy chrolideの貼付試験による角層の交代時間は16daysであった。2)表皮交代時間は豚で28.5days,ヒトで36.6daysとなった。3)C-mycは乾癬皮膚、tape-stripping後の豚皮膚に弱陽性であったが、P-53は陰性であった。4)スタウロスポリンは10muMで、カルフォスチンCは50muMで豚表皮DNA合成を抑制し、後者は可逆的な変化であった。後者はより選択的にG1集積をきだした。5)tape-stripping 24時間後、36時間後ではコントロール皮膚に比べカルモジュリン活性が亢進していた。6)CAF-200(細胞内ion analyser)による細胞内カルシウムの測定ではtape-stripping後の皮膚がコントロールに比べ高値を示した。まとめtape-stripping系を用いることにより、豚もしくはヒト表皮細胞のcell cycle、turn over taimeの測定が可能になり、G1期への進行にはC-myc,P-53の関与もあるが、protein kinaseの関与がより重要である可能性が示唆された。さらに増殖亢進時にカルモジュリン量の増加、(Ca^<2+>)iの増加がみられたことから細胞周期の進行にCa^<2+>-カルモジュリン系の正の調節を行っている可能性が示唆された。

The classical epidermal growth system is similar to that of psoriasis vulgaris. C-myc P-53 epidermal cell cycle unknown The tape-stripping system is used to determine the time of skin change, the time of skin change, and the time of skin change. C-myc,P-53 and ABC method (immunohistologic) were used to detect the tumor. Add the time of normal epidermis, psoriasis rash part epidermis and psoriasis rash free part to calculate. The progression of cell cycle in G1 and G2 phases is related to protein kinase and PKC(protein kinase C)inhibitor. The effect of PKC on the epidermal cell cycle is compared with that of PKC. The amount of G1 shortening was measured after tape-stripping. Results 1) The time of skin acquisition, DNA-flow cytometry, mitosis calculation, S phase of dolphin epidermis was estimated to be 12 days, and the time of corner layer replacement was estimated to be 16days. 2)Cuticle metasomatism time is 28.5 days, 36.6 days. 3)C-myc dry skin, tape-stripping after dolphin skin weak positive, P-53 negative. 4) It is possible to inhibit epidermal DNA synthesis by 10muM or 50 muM, or reverse it by 10 muM or 50muM. The latter is the G1 collection of the selected G1. 5)Tape-stripping 24 hours later, 36 hours later, the skin activity was increased. 6)CAF-200(intracellular ion analyzer) indicates the intracellular concentration and the skin concentration after tape-stripping. The relationship between C-myc,P-53, protein kinase and cell cycle, turn over ime in epidermal cells may be detected during G1 phase. The increase in the amount of Ca ~(2+)