表皮性POU転写因子Skn-1nを標的とした尋常性乾癬治療法開発のための基礎研究

以表皮POU转录因子Skn-1n为靶点开发斑块型银屑病治疗的基础研究

• 批准号: 15659259
• 负责人: 玉井 克人
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659259/
• 关键词: Skn-1; 転写因子; 表皮角化細胞; 遺伝子導入; 超音波

今回の萌芽研究で計画した研究実施計画は、1)表皮角化細胞の増殖・分化におけるSkn-1nの機能に関する研究、2)Sk-1n特異的RNAiを用いた表皮角化細胞の増殖・分化制御に関する研究、3)生体皮膚へのSkn-1n特異的RNAi導入に関する研究、の3つの研究内容からなる。1)表皮角化細胞の増殖・分化におけるSkn-1nの機能に関する研究:Skn-1の発現ベクターを作成し、ヒト表皮細胞株であるHaCat細胞に導入して表皮細胞の増殖・分化に与える影響を検討した。その結果、Skn-1nを発現させたHaCat細胞はコントロール細胞に比較して、増殖が低下することがMTTアッセイにより示された。また、Skn-1n発現細胞では、未分化ケラチノサイトマーカーであるBPAG1およびPVAのプロモーター活性がコントロールに比較して低下しており、分化傾向を示していると考えられた。2)Skn-1n特異的RNAiを用いた角化細胞の増殖・分化制御に関する研究:Skh-1nおよびSkn-1aのcDNA塩基配列を基に、Skn-1n特異的配列に対するsiRNAをデザインし、これを用いてSkn-1n特異的ノックダウンを培養正常ヒトケラチノサイトおよびHaCat細胞を用いて検討した。現在引き続きノックダウン条件の検討を進めている。3)生体皮膚へのSkn-1n特異的RNAi導入に関する研究:生体皮膚への遺伝子・核酸導入法開発を進めた。生体皮膚は角層バリアーが発達しているため、高分子DNAを導入することは極めて困難である。そのため、ヘアレスラット皮膚角層を50%グリコール酸で除去した後、FITC標識オリゴDNA溶液に浸し、超音波を種々の強度で照射することにより、生体表皮細胞にオリゴDNAを導入する条件を検討、最適条件を決定した。今後、この条件を用いて、2)で得られたSkn-1nノックダウン用siRNAを導入することにより、ラット皮膚でSkn-1nを特異的にノックダウンして、表皮細胞の形質変化を観察する予定である。

为这项胚胎研究计划的研究实施计划包括三个研究主题：1）关于SKN-1N在表皮角质形成细胞增殖和差异化中功能的研究，2）一项关于使用SK-1N特异性RNAI的表皮角质形成细胞的控制和差异化的研究研究的研究。 1）研究SKN-1N在表皮角化细胞的增殖和分化中的功能：我们创建了SKN-1的表达载体，并将其引入了HACAT细胞中，以检查人类表皮细胞系，以检查对表皮细胞增殖和分化的影响。结果表明，与对照细胞相比，表达SKN-1N的HACAT细胞的增殖减少了。此外，在表达SKN-1N的细胞中，与对照组相比，未分化的角质形成细胞标记BPAG1和PVA的启动子活性减少了，这表明具有区分的趋势。 2）研究使用SKN-1N特异性RNAi对角质形成细胞增殖和分化的控制：基于SKH-1N和SKN-1A的cDNA碱基序列，设计了SKN-1N特异性序列的SIRNA，并使用培养的正常人乳突细胞和HACININOCYTES和HACININOCYTES和HACININOCYTES和HACININOCYTES和HACATES细胞检查了SKN-1N特异性敲低。我们目前正在继续考虑敲低条件。 3）研究将SKN-1N特异性RNAi引入生物皮肤：我们已经进步了将基因和核酸引入生物学皮肤的方法。由于角膜屏障是在生物皮肤中发展的，因此引入聚合物DNA非常困难。因此，在用50％乙醇酸去除无毛大鼠的角膜层后，将其浸入FITC标记的寡素溶液中，并在各种强度下用超声辐射，以检查将寡素寡纳引入生物表皮细胞中的条件，并确定最佳条件。将来，使用这些条件，我们计划通过在2）中引入SKN-1N敲低的siRNA来特异性地击倒大鼠皮肤中的SKN-1N，并观察表皮细胞的性状变化。

项目成果

Kaneda, Y.: "Current status and future prospects of gene therapy technologies toward the treatment of intractable skin diseases."Arch Dermatol Res. 295. 63-66 (2003)

Kaneda, Y.：“基因治疗技术治疗顽固性皮肤病的现状和未来前景。”Arch Dermatol Res。

Oshima, K.: "Intrathecal injection of HVJ-E containing HGF gene to cerebrospinal fluid can prevent and ameliorate hearing impairment in rats."FASEB J. (in press). (2004)

Oshima, K.：“将含有 HGF 基因的 HVJ-E 鞘内注射到脑脊液中可以预防和改善大鼠的听力损伤。”FASEB J.（出版中）。

Tamai, K.: "Jpapanese guidelines for diagnosis and treatment of junctional and dystrophic epidermolysis bullosa."Arch Dermatol Res. 295. 24-28 (2003)

Tamai, K.：“日本交界性和营养不良性大疱性表皮松解症的诊断和治疗指南。”Arch Dermatol Res。