表皮性POU転写因子Skn-1nを標的とした尋常性乾癬治療法開発のための基礎研究

以表皮POU转录因子Skn-1n为靶点开发斑块型银屑病治疗的基础研究

• 批准号: 15659259
• 负责人: 玉井 克人
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659259/
• 关键词: Skn-1; 転写因子; 表皮角化細胞; 遺伝子導入; 超音波

今回の萌芽研究で計画した研究実施計画は、1)表皮角化細胞の増殖・分化におけるSkn-1nの機能に関する研究、2)Sk-1n特異的RNAiを用いた表皮角化細胞の増殖・分化制御に関する研究、3)生体皮膚へのSkn-1n特異的RNAi導入に関する研究、の3つの研究内容からなる。1)表皮角化細胞の増殖・分化におけるSkn-1nの機能に関する研究:Skn-1の発現ベクターを作成し、ヒト表皮細胞株であるHaCat細胞に導入して表皮細胞の増殖・分化に与える影響を検討した。その結果、Skn-1nを発現させたHaCat細胞はコントロール細胞に比較して、増殖が低下することがMTTアッセイにより示された。また、Skn-1n発現細胞では、未分化ケラチノサイトマーカーであるBPAG1およびPVAのプロモーター活性がコントロールに比較して低下しており、分化傾向を示していると考えられた。2)Skn-1n特異的RNAiを用いた角化細胞の増殖・分化制御に関する研究:Skh-1nおよびSkn-1aのcDNA塩基配列を基に、Skn-1n特異的配列に対するsiRNAをデザインし、これを用いてSkn-1n特異的ノックダウンを培養正常ヒトケラチノサイトおよびHaCat細胞を用いて検討した。現在引き続きノックダウン条件の検討を進めている。3)生体皮膚へのSkn-1n特異的RNAi導入に関する研究:生体皮膚への遺伝子・核酸導入法開発を進めた。生体皮膚は角層バリアーが発達しているため、高分子DNAを導入することは極めて困難である。そのため、ヘアレスラット皮膚角層を50%グリコール酸で除去した後、FITC標識オリゴDNA溶液に浸し、超音波を種々の強度で照射することにより、生体表皮細胞にオリゴDNAを導入する条件を検討、最適条件を決定した。今後、この条件を用いて、2)で得られたSkn-1nノックダウン用siRNAを導入することにより、ラット皮膚でSkn-1nを特異的にノックダウンして、表皮細胞の形質変化を観察する予定である。

The current research projects include: 1) functional studies on proliferation and differentiation of epidermal keratinocytes; 2) studies on the regulation of proliferation and differentiation of epidermal keratinocytes using Sk-1n-specific RNAi; 3) studies on the introduction of Sk-1n-specific RNAi into living Skn cells; and 3) research contents. 1)Study on the Function of Skn-1n in the Growth and Differentiation of Keratinized Epidermal Cells: To investigate the effects of Skn-1 on the Growth and Differentiation of Keratinized Epidermal Cells by HaCat Cell Transduction The results showed that Skn-1n was found in HaCat cells, and the growth rate was lower than that in HaCat cells. The activity of BPAG-1 and PVA was lower than that of the undifferentiated cells. 2) Studies on proliferation and differentiation of keratinized cells using Skn-1n-specific RNAi: Skn-1n and Skn-1a cDNA base alignment, Skn-1n-specific alignment, siRNA development, and use of Skn-1n-specific RNAi in culture of normal cells. Now let's go to the next step. 3)Research on Skn-1n-specific RNAi introduction into living skin: Development of gene and nucleic acid introduction method in living skin. It is difficult to introduce polymer DNA into the skin. After removing 50% of the DNA from the stratum corneum, FITC labeling, immersion in DNA solution, and intensity of ultrasound irradiation, the conditions for DNA introduction into living epidermal cells were discussed and the optimum conditions determined. In the future, these conditions will be used in the following ways: 2) To introduce siRNA into the skin, 2) To detect the morphological changes of epidermal cells.

项目成果

Kaneda, Y.: "Current status and future prospects of gene therapy technologies toward the treatment of intractable skin diseases."Arch Dermatol Res. 295. 63-66 (2003)

Kaneda, Y.：“基因治疗技术治疗顽固性皮肤病的现状和未来前景。”Arch Dermatol Res。

Oshima, K.: "Intrathecal injection of HVJ-E containing HGF gene to cerebrospinal fluid can prevent and ameliorate hearing impairment in rats."FASEB J. (in press). (2004)

Oshima, K.：“将含有 HGF 基因的 HVJ-E 鞘内注射到脑脊液中可以预防和改善大鼠的听力损伤。”FASEB J.（出版中）。

Matsuzaki, Y.: "Keratinocyte responsive element 3 (KRE3): Analysis of a keratinocyte-specific regulatory sequence in the 230-kD bullous pemphigoid antigen (BPAG1) gene promoter."J Invest Dermatol. 120. 308-312 (2003)

Matsuzaki, Y.：“角质形成细胞反应元件 3 (KRE3)：230-kD 大疱性类天疱疮抗原 (BPAG1) 基因启动子中角质形成细胞特异性调控序列的分析。”J Invest Dermatol。

Tamai, K.: "Jpapanese guidelines for diagnosis and treatment of junctional and dystrophic epidermolysis bullosa."Arch Dermatol Res. 295. 24-28 (2003)

Tamai, K.：“日本交界性和营养不良性大疱性表皮松解症的诊断和治疗指南。”Arch Dermatol Res。