新しい免疫電顕法による線状IgA水疱性皮膚症抗原の微細局在部位の解明

使用新的免疫电子显微镜方法阐明线性 IgA 大疱性皮肤病抗原的精细定位

• 批准号: 05770640
• 负责人: 石河 晃
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770640/
• 关键词: 線状IgA水疱性皮膚症; 自己免疫性水疱症; 免疫電顕法

線状IgA水疱性皮膚症(linear IgA bullous dermatosis)は、難治性の自己免疫性水疱症の一つである。患者血清中のIgAが皮膚基底膜部に結合することが知られているが、抗原の微細局在部位は未知である。今回、新しい免疫電顕法を用いて、抗体の沈着部位の解析を試みた。正常ヒト皮膚を液体プロパン(-190℃)にて急速凍結固定し、超低温下でメタノール置換し、Lowicryl KllMに包埋し、超薄切片を作成、免疫染色を施し観察した。その結果、残念ながら特異的な反応がみられず、手技の途中で抗原性が失活しているものと考えられた。そこで置換剤をアセトンに変更してみたが、結果は同様で、樹脂包埋そのものが問題であることが想定され、免疫電顕の手法の変更を余儀なくされた。一方、免疫ブロット法に関しては、13例の血清を用いて施行したところ、6例が97kD蛋白と、1例が255kD蛋白と反応することがわかった。この抗原の分子量と局在の関係をみるために1MNaCl分離皮膚を用いた蛍光抗体法を施行した結果、97kD蛋白を認識した6例全例を含む10例が表皮側と反応し、255kD蛋白を認識した1例をふくむ3例が真皮側と反応した。今回の結果は以上であるが、微細局在を解明するために現在凍結超薄切片法を施行し、いくつかの症例において金コロイドを用いた免疫染色で、良好な結果を得ている。すなわち表皮側の抗原は基底膜部の透明層に局在し、真皮側の抗原は係留細線維に関連して局在しているらしいというところまで解明された。本研究は現在最終結論を出すべく進行中であり、その結果は今年4月末、米国で開催されるSociety of Dermatology年次総会にて発表する予定である。

Linear IgA blistering dermatosis (linear IgA blistering dermatosis), refractory and autoimmune blistering. The IgA in the serum of the patient binds to the basement membrane of the skin. Now, the application of new immunoassays and the analysis of antibody deposition sites have been studied. Normal skin was frozen in liquid (-190℃), replaced at ultra-low temperature, embedded with low-icryl KllM, ultra-thin sectioning, and observed with immunostaining. The result is that the lingering thoughts are reflected in the special reaction, and the antigenicity of the hand skills is inactivated during the process. For example, if you want to change the color of the resin, you can change the color of the resin. One case was infected with 97kD protein and one case was infected with 255kD protein. The molecular weight of the antigen was determined by the light antibody method. The results showed that the 97kD protein was recognized in all cases, including 10 cases in the epidermis and 1 case in the dermis. The results of this study are as follows: 1. The micro-tissue is analyzed by frozen ultra-thin section method. 2. The immunostaining method is used in the diagnosis of the disease. 3. The results are good. The antigen on the epidermal side is located in the transparent layer of the basement membrane, and the antigen on the dermal side is located in the thin line. The final conclusions of this study are now in progress and the results are expected to be presented at the Society of Dermatology annual conference in late April.