サイトカインの膵島細胞障害におけるnitric oxideの関与の検討

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Interleukinlbeta(IL-1beta)による膵島細胞障害に膵島細胞の産生するNOが関与していることが最近報告された.私どもはinterferon-gamma(IFN-gamma)とtumor necrosis factor(TNF-alpha)併用による膵島細胞障害もNOによるものであるかどうかを明らかにするために培養したマウス膵島細胞に400U/mlのTNF-alphaとIFN-gammaを作用させ,Griess反応を用いてnitrite量を測定した.INF-gamma,TNF-aはそれぞれ単独ではnitrite産生を誘導しなかったが,両者を併用するとIL-1によるのと同程度のnitrite上昇がみとめられた.ストレプトゾトシンやアロキサンによる膵島細胞障害ではfree radicalによるDNA切断とその修復に伴うNADの減少が示されている.そこでマウス膵島細胞とbeta-cell line(beta-TCI)にNO donorであるnitroprussideを作用させてNAD含量の測定を行ったところ,いずれもNADの減少が認められた.またこのNAD減少は3-aminobenzamide(5mM)を加えることにより抑制された.次にpoly(ADP-ribose)合成の関与をみるために,beta-TCIに0.05-0.4mMのnitroprussideを作用させ,フィルター法を用いて^3H-NADの不溶分画への取り込みを測定した.その結果,NOがpoly(ADP-ribose)合成酵素活性を上昇させることが証明された.この反応は5mMの3-amimobenzamideにより抑制された.以上の結果により,サイトカインが膵島細胞のNO合成を促進し,これによるDNA鎖の切断を介してpoly(ADP-ribose)合成亢進が惹起されることが膵島細胞障害の1つの機序であると考えられる.