白血病細胞の分化誘導および増殖、分化のメカニズムについての研究

白血病细胞分化诱导、增殖、分化机制研究

• 批准号: 05770809
• 负责人: 日野 雅之
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770809/
• 关键词: フレンド赤白血病細胞; c-kit; activin; Scatchard解析; 分子生物学

フレンド赤白血病細胞株F5-5は生理活性物質であるアクチビンによってヘモグロビン産生細胞に分化するが、その際みられる造血因子受容体発現の変化を検討した。造血幹細胞に発現していると考えられるc-kit遺伝子の発現をみるため、c-kit遺伝子のプライマーを作成し、RT-PCR法によりc-kit遺伝子を増幅し、クローニングした。Sanger法を用いてシークエンスし、マウスc-kit遺伝子であることを確認し、それをプローブとしてNorthern法により解析した。アクチビンを添加したF5-5細胞におけるc-kit mRNAの発現は分化に伴い経時的に減少していることが見いだされた。実際に蛋白レベルでの発現にも反映されているかを検討するためにc-kitのリガンドであるマウス幹細胞因子(SCF)をクロラミンT法を用いてヨード標識し、70000cpm/ngの標品が得られた、binding実験を行ったところ、やはり分化に伴い減少し、アクチビン添加4日目には10%に減少していた。Scatchard解析を行ったところ、分化した細胞でもaffinityには変化なく、細胞表面のレセプター数の減少によるものであることが判った。さらに、分化におけるc-kitの役割を解析するために、c-kit遺伝子のアンチセンスを作成し、c-kit遺伝子の発現を抑制したが、ヘモグロビン合成細胞への分化はみられなかった。以上より、アクチビンは赤白血病細胞をヘモグロビン合成細胞に分化誘導し、その際c-kit遺伝子の発現が低下するが、これ自身が分化へのシグナルにはなっておらず、分化に伴う変化と考えられる。さらにアクチビンによる分化におけるアポトーシスの関与について検討したが、アポトーシスは認められず、他の機序が考えられる。

To investigate the transformation of hematopoietic factor receptor production in leukemia cell line F5-5 during differentiation of physiologically active substances and production of hematopoietic factor receptors. Hematopoietic stem cell development, c-kit gene development, c-kit gene production, RT-PCR method, c-kit gene amplification, c-kit gene development The Sanger method is used to determine whether or not the C-kit is valid. The expression of c-kit mRNA in F5-5 cells was decreased during differentiation. In the meantime, the expression of c-kit and stem cell factor (SCF) was detected by T method, and the standard of 70000cpm/ng was obtained. The binding activity was decreased. The differentiation was decreased by 10%. Scatchard analysis: cell affinity, cell surface affinity, cell surface affinity C-kit gene production, inhibition of c-kit gene production, and differentiation of c-kit gene. The expression of c-kit gene is lower than that of leukemia cell differentiation and differentiation. In addition to the above, the company also provides services to the public.