肝細胞及び骨髄におけるトロンボポエチン産生の生理的調節機構についての研究

肝细胞和骨髓生成血小板生成素的生理调控机制研究

• 批准号: 08770855
• 负责人: 日野 雅之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770855/
• 关键词: トロンボポエチン; 肝細胞癌細胞株; 骨髄ストローマ細胞

1.Thrombopoietin (TPO)が肝臓で産生されていることから、RT-PCRを用いてTPO遺伝子を増幅し、TAクローニングベクターを用いてクローニングした。さらにシークエンスをおこない、TPO遺伝子であることを確認した。分化型肝細胞癌株HepG2を用いてNorthern解析を行い、TPO遺伝子が過剰発現をしていることを見いだし、TPOの産生細胞が肝のparenchymal cellであることを明らかにした。2.HepG2細胞で発現しているTPOの生理活性を確認するため、培養上清をfactor (GM-CSF. IL-3. TPO)依存性白血病細胞株Mo7Eに添加したところ、増殖が刺激された。3.TPOには、種々のisoformが報告されているが、報告者もexon 6に116bpの欠損もみとめたisoformをクローニングした。quantitative RT-PCRを用いて正常な肝臓よHepG2細胞を比較したところ、正常肝臓ではTPO isoformが、intact TPOとほぼ同程度に発現していることがHepG2細胞では、intact TPOが過剰発現していることがわかった。4.Hepatocyte growth factor (HGF)、interleukin-6(IL-6)、interleukin-11(IL-11)、leukemia inhibitory factor (LIF)、platelet derived growth factor (PDGF)、transforming growth factor-β (TGF-β)などのcytokineを用いてTPO mRNAの発現を検討したが、変化は見られず、HepG2細胞が正常の調節機構から逸脱している可能性が考えられた。5.骨髄ストローマ細胞を調節し、RT-PCR法でTPO mRNAの発現を検討したところ、mRNAの発現がみられ、ストローマ細胞でのTPO産生を確認した。

1. Theroitin (TPO) is produced in the liver and is used in RT-PCR to increase the amplitude of TPO gene.さらにシークエンスをおこない、TPO遗伝子であることを确认した。Differentiated hepatocellular carcinoma HepG2 cell line was analyzed by Northern analysis, TPO gene expression was detected, and TPO gene production was detected by liver parenchymal cell analysis. 2. HepG2 cell growth and development, TPO physiological activity confirmation, culture supernatant factor (GM CSF). IL-3. TPO)-dependent leukemia cell line Mo7E was stimulated by addition of TPO and proliferation. 3. TPO isoform for 116bp Quantitative RT-PCR was used to compare HepG2 cells with normal liver TPO isoform and intact TPO to the same extent. 4. Hepocyte growth factor (HGF), interleukin-6(IL-6), interleukin-11(IL-11), leukemia inhibitory factor (LIF), platelet derived growth factor (PDGF), transforming growth factor-β (TGF-β), and the expression of TPO mRNA in HepG2 cells were investigated. 5. The expression of TPO mRNA was detected by RT-PCR.

项目成果

Masayuki Hino et al: "Constitutive expression of the thrombopoietin gene in a human hepatoma cell line" Biochem Biophys Res Comm. 217. 475-481 (1995)

Masayuki Hino 等人：“人肝癌细胞系中血小板生成素基因的组成型表达”Biochem Biophys Res Comm。