骨誘導蛋白(BMP)の活性補助因子の検索

寻找骨诱导蛋白（BMP）的激活辅因子

• 批准号: 05771086
• 负责人: 飯島 史朗
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Kyoritsu University of Pharmacy
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771086/
• 关键词: Bone Morphogenetic Protein; Bone Inducig; Calcium; SDS-PAEE

異所性に骨を形成する蛋白(BMP)の存在が報告されている。しかし、BMPの精製を進めると骨誘導活性の低下が起きる。このことは、BMP単体でも骨誘導活性を有するが、他の蛋白の関与により作用が増強されることを示唆する。本研究は、このBMP活性に関与する蛋白(BMP補助蛋白)の同定を行うため、骨基質中に含まれる各種蛋白を精製し、BMP補助蛋白の検索を行い、蛋白のアミノ酸配列を明らかにすることを目的とした。BMP補助蛋白検索法は、仔牛大腿骨を粉砕し、脱脂、脱灰、グアニジン塩酸で骨基質蛋白を抽出する。この抽出蛋白(G-EXT)をヘパリンセファロースカラムにより精製後、電気泳動分取装置を用いて分子量ごとに精製し、BMPおよびそれ以外の蛋白を得た。骨誘導活性を調べるためこれらの蛋白ととコラーゲンとの混合物を作成し、この混合物を4週齢ラットの筋肉中に埋入し、18日後、軟X線撮影、石灰化物の摘出を行った。この摘出物の重量、カルシウム含量、および組織連続標本による骨誘導活性の測定を行った。今回の研究はBMP補助蛋白の検索分子量範囲を10〜40kDaに限定して行った。その結果、BMPに10〜28kDaの蛋白を混合した場合と、33kDa〜40kDaの蛋白を混合した場合では、10〜28kDaの蛋白を混合した方でより強い骨誘導能が認められた。更にこの10〜28kDaの蛋白を詳細に検討したところ27.5kDaの蛋白質を含む場合、有為差は認められないもののカルシウ含量が増加していた。また、この27.5kDaの蛋白を含んだ試料により形成された骨組織は、他の試料で作成した骨組織とは骨形成の状態が異なっていた。以上のことより骨基質中に含まれる27.5kDaの蛋白質は何らかの形で骨誘導に関与しているものと考えられた。

The presence of heterosexual bone-forming protein (BMP) has been reported. BMP purification is progressing and bone induction activity is decreasing. This protein is related to bone induction activity, and it is also related to bone induction activity. The aim of this study is to clarify the relationship between BMP activity and protein (BMP helper protein) identity, purification of various proteins contained in bone matrix, BMP helper protein identification and protein acid alignment. BMP complement protein extraction method for calf thigh bone powder, degreasing, deashing, and extraction of bone matrix protein The extracted protein (G-EXT) was purified and separated by electrokinetic separation device. Bone induction activity was modulated by the preparation of a mixture of protein and calcium. After 4 weeks, the mixture was embedded in the muscle. After 18 days, soft X-ray imaging and lime extraction were performed. The weight of the extract, the content of the extract, and the osteoinductive activity of the tissue were determined. In this study, the molecular weight range of BMP helper protein was limited to 10 ~ 40kDa. As a result, BMP proteins of 10 ~ 28kDa were mixed, 33kDa ~ 40kDa proteins were mixed, 10 ~ 28kDa proteins were mixed, and strong bone-inducing activity was recognized. In addition, the protein content of 10 ~ 28kDa was increased when the protein content of 27.5 kDa was increased. This 27.5 kDa protein is contained in the sample and forms bone tissue. The above mentioned protein of 27.5 kDa in bone matrix is related to bone induction.